丹参和三七单体成分对干细胞分化的影响

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1、丹参和三七单体成分对干细胞分化的影响【关键词】干细胞;诱导剂;丹酚酸;丹参素;丹参酮;三七总皂苷;综述　干细胞是具有自我复制能力的多潜能细胞,在一定条件下,可以分化成多种功能细胞。目前,干细胞移植临床用于修复受损器官,在某些病种如白血病、股骨头坏死、急性心血管病变等领域已取得突破性进展。但干细胞移植后在一定条件下才能分化和增殖,受干扰因素非常多,而且存活率往往不理想。所以,学术界期望找到合适的诱导剂和条件以保证干细胞沿预期方向分化、增殖,并取得足够存活量和存活期。另外,作为诱导剂,西药的诱导力度比较强且稳定,如5-氮杂胞苷最常用,但

2、如果应用于人体,其毒性往往令人望而却步,而且其诱导的干细胞存活率、存活时间不能令人满意。王氏等[1]基于干细胞研究成果,提出了有关干细胞的理论假说,为中医药理论基础研究展示新的思路,并指出,通过探讨中药在干细胞移植中的治疗机理,寻找高效的诱导分化剂,提高成年干细胞或胚胎干细胞诱导分化成理想细胞的成功率,是中医治疗理论创新的时代要求。近年来,有关中药单体成分对干细胞分化的影响研究所取得的成就已为业界公认。为此,笔者选取近10年来有关丹参、三七单体成分在干细胞诱导分化方面的研究进行整理,对所选用文献中干细胞提纯方法、诱导剂浓度进行了归纳

3、分析,希望对今后的进一步研究有所帮助和启发。14　　1资料与方法　　文献检索策略：应用计算机检索“中国期刊全文数据库”和“维普中文科技期刊数据库”1999-2009相关文献;检索词为“干细胞、丹酚酸、丹参素、丹参酮、三七总皂甙(苷)”。纳入标准：内容与中药单体成分丹酚酸或丹参素或隐丹参酮或丹参酮ⅡA或三七总皂甙(苷)或三七皂苷及干细胞有关的文献。排除标准：较陈旧及重复的文献,非中药单体而是中药复方的文献,与干细胞无关及属于临床疗效观察的文献。　　文献评价：共收集到42篇相关文献,排除17篇,25篇文献符合标准,其中1篇是述评类文献,

4、其余均为实验研究性文献。25篇中1篇介绍干细胞研究对中医药理论发展的思考,15篇介绍丹参不同单体成分的文献,9篇是关于三七单体成分的文献。　　2丹参单体作为干细胞分化诱导剂的研究　　2.1诱导干细胞向心肌细胞分化　　陈氏等[2]用贴壁培养法分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),免疫荧光法检测细胞抗原CD44和CD34,分别用含5μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)和3014mg/L丹酚酸B(SalB)的低糖DMEM培养液培养MSCs24h后,RT-PCR法检测心肌特异性转录因子Nkx2.5、GATA-4和心肌特异性蛋白

5、α-actinmRNA的表达。结果显示,用贴壁培养法可获得纯化的MSCs,SalB可诱导MSCs向心肌样细胞分化。研究人员通过培养、纯化及鉴定大鼠MSCs,用SalB、5-aza、SalB联合5-aza分别定向诱导分化,观察此过程中MSCs的形态学变化并采用免疫细胞化学法鉴定诱导后MSCs心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达,检测GATA-4和Nkx2.5基因表达。结果SalB可在体外诱导大鼠MSCs定向分化为心肌样细胞,其与5-aza联合诱导可明显提高MSCs向心肌细胞分化的能力,并且在Nkx2.5基因表达上SalB的优势更加明

6、显,其中SalB纯度为78%(终浓度为250μg/L)[3-5]。华氏等[6]选用成年近交系Wistar大鼠,利用percol1分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增;免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定。分别应用10μmol/L5-aza及250μg/LSalB联合5-aza对第9代MSCs联合诱导24h,于诱导后第4周检测Desmin、α-actinmRNA的表达。结果发现,SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用。　　2.2诱导干细胞向神经元样细胞分化14　　庹

7、氏等[7]观察SalB诱导小鼠胎脑神经干细胞分化后细胞膜结构,发现SalB诱导神经干细胞分化神经元细胞膜的窗孔样结构与小凹明显增多,提出可能与SalB增强细胞内外物质交换功能和促进细胞内信号转导有关,其中SalB在培养基中终浓度为0.5μg/mL。原氏等[8]体外分离培养猴MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,用含隐丹参酮的无血清L-DMEM诱导MSCs分化为神经元样细胞,发现隐丹参酮可在体外将猴MSCs诱导分化为神经元样细胞,其中隐丹参酮浓度为20mg/L。夏氏等[9-10]采用Ficoll-Paque液分离成人MSCs,体外扩增,

8、流式细胞仪检测表面抗原表达,采用含隐丹参酮与丹参酮Ⅱ(TanⅡA)无血清DMEM诱导MSCs分化为神经元样细胞。指出隐丹参酮体外可诱导成人MSCs分化为神经元样细胞,TanⅡA体外可诱导成人MSCs分化为神经元样细胞,其中TanⅡA浓