丹酚酸b作用不同时间对高糖高脂内皮细胞凋亡的抑制作用

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1、丹酚酸B作用不同时间对高糖高脂内皮细胞凋亡的抑制作用作者：鲍丽颖范英昌郑纺张洁【摘要】目的观察丹酚酸B抑制高糖高脂诱导的内皮细胞凋亡的作用。方法以糖基化终末产物(AGEs)和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)联合作用诱导人脐静脉内皮细胞凋亡，通过Hochest33258染色，观察并比较丹酚酸B及洛伐他汀作用不同时间(12、24、36、48、72h)，抑制高糖高脂诱导的内皮细胞凋亡的效果。结果研究表明，洛伐他汀作用12、24h时，抑制内皮细胞凋亡效果明显，而丹酚酸B作用36、48h及72h抑制内皮细胞凋亡效果显著。结论与洛伐他汀相比，丹酚酸B抑制

2、高糖高脂诱导的内皮细胞凋亡的作用发挥得较迟缓，但效果持久。【关键词】丹酚酸B;糖基化终末产物;氧化低密度脂蛋白;内皮细胞凋亡　　【Abstract】ObjectiveTocomparetheeffectsofsalvianolicacidBandlovastatininhibitingendothelialcellsapoptosisafterincubationfordifferenttime.MethodsHumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)apoptosiswereinducedbyAGE

3、sandoxLDL.AfterHUVECswereincubated7salvianolicacidBandlovastatinfor12,24,36,48,72h,percentageofapoptosiswereobservedunderfluorescentmicroscopebyHochest33258staining.ResultsAlthoughtreatmentwithlovastatinfor12,24h,apoptosisdecreasedsignificantly(P<0.05),treatmentwithsalv

4、ianolicacidBfor36,48and72h,apoptosisdecreasedsignificantly(P<0.05).ConclusionsComparedwithlovastatin,salvianolicacidBmightexertalaterbutlastinginhibitioneffectonendothelialcellapoptosisinducedbyhighsugarandhighfat.　　【Keywords】SalvianolicacidB;Endothelialcellsapoptosis　

5、　研究发现糖尿病(DM)患者血管并发症的产生与糖代谢和脂质代谢异常密切相关〔1〕。当机体长期处于高血糖状态时,导致糖基化终末产物(AGEs)的产生多于清除，造成其在体内积聚，损伤血管内皮，可能是DM动脉粥样硬化的始动因素之一。本实验中采用AGEs联合氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导内皮细胞凋亡，建立细胞模型，以洛伐他汀为阳性对照，选取不同作用时间，观察丹酚酸B对内皮细胞的保护作用，进一步探讨DM致动脉粥样硬化的机制及寻找有效药物，为防治DM血管并发症提供理论依据。7　　1材料与方法　　1.1药物、试剂与仪器丹酚酸B(天津天士力现代中药资源

6、有限公司，批号20060601);洛伐他汀胶囊(扬子江药业，国药准字H12980272);人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)购自天津血液研究所;oxLDL购自中国医学科学院研究所;AGEs、RPMI1640培养基、0.25%胰酶购自Gibco公司;新生胎牛血清购自HyClone公司;四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma公司;超净工作台、CO2恒温培养箱、倒置相差显微镜、荧光显微镜。　　1.2MTT比色法确定AGEs、oxLDL丹酚酸B及洛伐他汀处理内皮细胞的最佳浓度取对数生长期细胞制成1×105/ml的细胞

7、悬液，接种于96孔培养板内，每孔100μl，设6个复孔，换无血清培养液同步化24h后加入不同浓度的AGEs,对照孔及调零孔加100μl培养液，继续培养24h，于结束前4h每孔吸去上清液，加100μlMTT(浓度为0.5mg/ml)继续培养4h，调零组不加MTT，吸去全部上清，然后每孔加200μlDMSO，震荡摇匀，于酶联免疫检测仪上测每孔吸光度(检测波长570nm)，按下列公式计算抑制率(IR)：IR=(1-实验组吸光度值/对照组平均吸光度值)×100%。oxLDL、丹酚酸B及洛伐他汀处理内皮细胞的最佳浓度方法同上。　　1.3分组1×105

8、个/ml接种细胞于24孔培养板中，置于377℃、5%CO2培养箱内培养。换无血清培养液同步化24h，随机分为：①正常对照组;②模型组：加入终浓度为100μg/ml的