不同营养因子组合对大鼠脊髓神经元的作用研究

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1、不同营养因子组合对大鼠脊髓神经元的作用研究【摘要】探讨NGF、bFGF和BDNF的不同组合对大鼠脊髓神经元的作用。［方法］利用神经元培养技术，将新生1d的SD大鼠脊髓神经元接种于培养板，根据不同因子两两组合分为3个实验组、空白对照组和单因子对照组，因子终浓度均为50ng/ml。倒置相差显微镜动态观察，接种后第3、7d细胞爬片行βtubulin3免疫荧光染色和Hoechst染色。测量阳性细胞最长突起长度，计算阳性细胞率，第1、3、5、7、9d行MTT检查，以OD值绘制生长曲线。［结果］各实验组神经元突起长度均优于对照组（P<0.05），联合

2、应用组优于单因子组，其中以A组（BDNF+bFGF）突起最长，各实验组βtubulin3阳性细胞率均高于对照组，MTT结果与染色结果一致。［结论］特定浓度下NGF、bFGF及BDNF可以有效促进大鼠脊髓神经元轴突的生长，并可有效维持神经元细胞存活，联合应用作用增强，BDNF+bFGF作用最强。Abstract：［Objective］ToinvestigatethecombinedeffectsofdifferentneurotrophincouplesofNGF,bFGF,BDNFonratspinalcordneurons.［Method］S

3、pinalcordneuronswereobtainedfromSDratsbornwithin1d,andthenwereseededincultureplates.DifferentfactorsandtheircoupleswereaddedineachchamberwhileDMEM/F12servedascontrols,concentrationofNGF,bFGForBDNFwere50ng/ml.Phasecontrastmicroscopeobservation11wasdone.Atthe3rdand7thdayafterin

4、cubation,thecellsweredetectedbyβtubulin3immunofluorescenceandHoechststaining.Thelengthofneuritiswasmeasured，andthenumbersofneuroncellsandnuclearsweredetermined.Atthe1st,3rd,5th,7thand9thdayMTTmethodwasused,andthegrowthcurvewasmadeaccordingtoODresults.［Result］Thelengthofaxona

5、ndpositiverateintheexperimentalgroupsweresuperiortothoseinthecontrolgroup(P<0.05).Theeffectsinthecombinedgroupsweresuperiortothesinglegroups,especiallyinthegroupofBDNF+bFGF.MTTmethodproducedthesameresultsasstaining.［Conclusion］NGF,bFGFandBDNFcanenhanceratspinalcordneuronal

6、neuriteoutgrowthandsurvival.Combineduseofanytwocanproducebetterresults,especiallyforthecombineduseofBDNFandbFGF.Keywords：neurotrophin;spinalcord;neuron;neuriteoutgrowth;cellculture　外周神经损伤后，损伤神经的修复与众多因素有关，其中相应节段脊髓神经元的存活与轴突再生非常关键。神经生长因子（nervegrowth11factor，NGF）作为最早发现也是研究最为全面的神经

7、营养因子［1］，其促神经元生长与存活的功能是众所周知的［2］。碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor，bFGF）具有促进神经元生长、保护神经细胞、促进神经损伤修复的作用［3］。BDNF（brainderivedneurotrophicfactor，BDNF）也是神经营养因子家族中经典的一员，具有支持神经元存活与突起生长的作用。这3种因子既然都有较强的促神经元存活与生长的特性，那么联合应用对脊髓神经元的作用如何，哪种组合作用最强？为此作者设计了这个实验。1材料与方法1.1动物和材料　　新生1dSD大鼠由第四

8、军医大学实验动物中心提供。DMEM/F12培养基、新生牛血清购自Gibco公司，FITC标记羊抗鼠IgG购自Boster公司，Hoech