北五味子藤茎多糖的提取及含量测定

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1、北五味子藤茎多糖的提取及含量测定【摘要】目的从不同品种的北五味子藤茎中提取多糖并测定多糖含量。方法经脱脂、醇提后，用水提醇沉法提取多糖，用苯酚-硫酸法测定其含量。结果五味子藤茎中多糖含量为2.46%～4.44%，平均回收率为100.26%，RSD=1.55%(n=6)。结论不同品种的北五味子藤茎多糖的含量有一定的差异。【关键词】北五味子;多糖;提取;苯酚-硫酸法　北五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.为木兰科北五味子属植物，主产东北，为常用中药，《神农本草经》将其列为上品，具有补肾、益气、生津、固涩等功效。北五味子的化学成分主要是五

2、味子木脂素、挥发油、多糖等[1]。北五味子粗多糖具有保肝作用，能对抗肝细胞脂质过氧化、促进肝再生和利胆作用[2];具有增强机体抗应激能力和免疫功能，还具有改善体内自由基代谢紊乱的作用;能明显提高小鼠耐氧及抗疲劳能力，增加正常小鼠免疫器官重量，并明显增强小鼠网状内皮系统的吞噬功能，有较好的免疫兴奋作用和抗衰老作用[3]。通过我们的初步研究，五味子藤茎也含有大量的多糖类成分，因此对五味子藤茎中多糖含量进行了测定。本文采用热水浸提法，用苯酚-硫酸法测定北五味子藤茎中多糖的含量。　　1材料与仪器6　　1.1药材来源北五味子藤茎供试品共9种，黄果一年生，461一年生，461两年

3、生，462一年生，462两年生，抚松1号一年生，抚松1号两年生，抚松2号一年生，抚松2号两年生。洗净，切断，55℃烘干，粉碎，粉末混合均匀后，装于自封袋中，置于干燥器中保存，备用。样品于2009-11采自吉林左家中国农业科学院特产研究所药用植物资源圃，经中国农业科学院特产研究所沈育杰研究员鉴定为木兰科(Magnoliaceae)五味子属(SchisandraMichx)植物。　　1.2试剂无水乙醇、铝片、NaHCO3、丙酮、氯仿、正丁醇、浓硫酸、苯酚、葡萄糖、蒸馏水等均为国产分析纯。　　1.3仪器UV-2450紫外分光光度计,SHIMADZUCorporation;数

4、显恒温水浴锅HH-6，常州澳华仪器械有限公司产品;电热恒温鼓风干燥箱101-1，上海路达实验仪器有限公司产品;旋转蒸发器R502B，上海申生科技有限公司产品;超生波清洗仪SK8200H，上海科导超声仪器有限公司产品;150ml索氏提取器，北京玻璃仪器厂产品。　　2方法与结果　　2.1葡萄糖标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1038g，用蒸馏水溶解并定容到100ml即为1.0386mg/ml的葡萄糖储备溶液。吸取1ml葡萄糖储备溶液于100ml容量瓶中，用水稀释到刻度，作为葡萄糖标准溶液。　　2.2苯酚溶液的配制取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHC

5、O30.05g，蒸馏，收集182℃馏份，称取10.0g，加水溶解定容于200ml容量瓶中，放冰箱备用。　　2.3标准曲线绘制精密量取葡萄糖标准溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml置具塞试管中，分别加蒸馏水至1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液1.0ml,摇匀，然后加浓H2SO45.0ml，充分摇匀，置40℃水浴中恒温30min[4]，取出冷却至室温。另以蒸馏水同上操作为空白对照，在490nm处测定吸光度，绘制标准曲线，建立回归方程:A=0.0104C+0.07033，r2=0.9996。葡萄糖含量在1.038～6.228μg/ml范围内呈良好的线性关系

6、。　　2.4精密度实验精密吸取标准品溶液1.0ml6份，同“2.3”项下操作，结果显示吸光度的RSD=1.27%。　　2.5北五味子藤茎多糖的提取与精制称取55℃干燥的北五味子藤茎400g，用清水洗净，加水4000ml，微沸煎煮1h，过滤，滤渣加水4000ml，超声30min后继续煎煮1h，过滤，合并提取液，加热浓缩至400ml。加入乙醇使溶液中乙醇含量为80%，放置12h，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤。得到棕色粗多糖。将粗多糖溶于水，用氯仿∶正丁醇=4∶61除去蛋白，加入0.1%活性炭，置于40℃的水浴锅中搅拌40min[5]，抽滤,滤液加入乙醇使溶液含乙醇达

7、80%,静置过夜,抽滤,残渣用无水乙醇、丙酮反复洗涤，真空干燥，即得精制北五味子藤茎多糖。　　2.6换算因子测定精确称取60℃干燥恒重的北五味子藤茎多糖233mg，置100ml容量瓶中，加入少量蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为多糖储备液。精确量取多糖储备液0.20ml，加水至1.00ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值，根据标准曲线计算浓度。按下式计算换算因子：f=W/CD。式中W为多糖重量(μg)，C为测试液中据标准曲线计算得到的单糖浓度(μg·ml-1)，D为多糖的稀释因子。测得f=0.629(n=6)。　　2.7样品含量的测定精密称取