乙肝两对半检测中(南京)

《乙肝两对半检测中(南京)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、乙肝两对半免疫学检测相关问题研讨中山三院检验科　李林HBV感染的实验室检测是目前国内最为常见的检验项目，也是医患纠纷产生较多的领域之一。卫生部临床检验中心李金明乙肝两对半：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。检测结果：定性、半定量、定量。试剂原材料：抗原（天然抗原、重组抗原）、抗体（单抗、多抗、Fab）。检测技术：ELISA、化学发光、时间分辨荧光、免疫层析等。检测方法：夹心法（一步法，两步法），竞争法（固相－液相竞争法，液相－液相竞争法等）。一、HBsAg方法：双抗体夹心法：两步法，一步法。试剂原材料：HBsAb（McAb、PcAb）或其酶解产物Fab。双抗体夹心法模

2、式：固相载体AbAg标记AbHBsAg抗原表位1、共同决定簇：a（aa124-147）；2、型特异决定簇：（1）d/y（aa122，赖氨酸/精氨酸）；（2）w/r（aa160，赖氨酸/精氨酸）；四种亚型：adr、adw、ayr、ayw。检测中常见的问题1、一步法测定中的钩状效应（Hookeffect）：一步法检测时，受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及标记抗体结合，而不能形成“固相抗体—抗原—标记抗体”夹心复合物。此时反应后的检测信号位于抗原过剩带上，与标准曲线位于抗体过剩带上的某一抗原浓度的检测信号相同，如按抗体过剩带上的检测信号测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象称为钩状效应

3、。钩状效应严重时，可出现假阴性结果。双抗体夹心一步法的钩状效应（示意图）:固相载体固相AbAg标记Ab钩状效应时分析浓度与检测信号关系图：检测信号抗体过剩带抗原过剩带抗原分析浓度HBsAg检测试剂原材料与钩状反应的关系：原材料：HBsAb。多克隆抗体：免疫动物或直接从感染者血清中所获得，来源于不同的B细胞克隆，可含有针对同一抗原分子不同的抗原表位（a、d/y、w/r）的多种定向抗体。单克隆抗体：由一株B细胞杂交瘤产生的只针对某一特定的抗原表位的高度均一，高度专一性的抗体。McAb制备的试剂受钩状效应的影响较PcAb为轻：Ig的一个Fab片段只能与一个抗原表位结合。McAb为针对同一抗原表位的均

4、一抗体分子群。HBsAg分子虽具有三个不同的表位(a、d/y、r/w)，但一分子HBsAg同样的表位只有一个，只能封闭一个单体McAb的一个抗原位点，两分子抗原才能封闭一个McAb单体。而PcAb为针对同一抗原不同表位抗体分子群(抗a、抗d/y、抗w/r)，一分子HBsAg上不同的表位可同时与针对不同表位的两个以上单体PcAb结合，其封闭作用的效率高于对McAb。McAb试剂的钩状效应固相载体McAb(抗a)Ag标记McAb(抗d)PcAb试剂的钩状效应固相载体McAb(抗a)标记McAb(抗r)标记McAb(抗d)钩状效应是HBsAg一步法检测时不可避免的现象；由于钩状效应的存在，一步法检测

5、HBsAg所得到的检测信号无法确定其真实性；解决勾状效应的根本方法为固相抗体与抗原反应后分离游离抗原，再加标记抗体的两步法检测：第一步：包被抗体捕获抗原成为固相，然后分离游离抗原；第二步：固相抗原与标记抗体结合，分离液相标记抗体后记录检测信号。两步法检测：固相载体AbAg标记Ab两步法检测时目的检测物浓度和检测信号关系曲线检测信号分析浓度易误解为两步法的一步法检测：1、标本＋生物素化抗体＋标记抗体　　生物素化抗体－抗原－标记抗体复合物；2、加入亲和素包被的固相载体　　固相生物素化抗体－抗原－标记抗体复物；3、洗涤，判读结果。2）人抗鼠抗体效应(Humananti-mouseeffect,HAM

6、A效应)对检测的干扰产生HAMA的原因：经常接触老鼠；肿瘤病人进行鼠单克隆抗体的治疗。用鼠源McAb检测HBsAg时，如样品中有HAMA，就会产生假阳性或假阴性。非鼠源的PcAb可消除HAMA效应，IgFab（Fab’)可消除HAMA引起的假阳性。HAMA效应的假阳性模式：标本中的人抗鼠抗体分别与固相HBsAb和标记HBsAbMcAb结合，形成固相HBsAb－HAMA－HBsAb复合物（双抗原夹心），提供假阳性检测信号。固相载体固相McAb标记McAb人抗鼠抗体HumanAnti-MouseAntibodies(HAMA)HAMA效应的假阴性模式:Figure3-6HowHAMAgenerat

7、esafalsenegative3)S基因突变引起的HBsAg漏检：基因突变引起“a”决定簇内部一个或多个氨基酸置换、缺失或插入，HBsAg蛋白质氨基酸组成发生改变，导致其抗原性产生变化。变异率高，自然变异和免疫逃避，变异无地域性。HBsAg抗原性发生改变，不能被野生型HBsAb所识别。此时用一般的国产试剂盒可能检不出。能导致HBsAg阴性的S区变异145甘氨酸精氨酸aa124半胱氨酸酪氨酸aa1