super007-004.1 人类abo血型a亚型基因分型检测试剂盒(pcr-ssp法)说明书

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1、天津市秀鹏生物技术开发有限公司TianjinSuperBiotechnologyDevelopingCo.,Ltd人类ABO血型－A亚型基因分型检测试剂盒（PCR-SSP）包装规格：4/8/20人份产品代码：SUPER007-004-004SUPER007-004-008SUPER007-004-020★仅供研究，不用于临床诊断Super007-004.19【产品名称】通用名称：人类ABO血型－A亚型基因分型检测试剂盒(PCR-SSP)英文名称：HumanABOBloodtype－Asubgroupgenotypingkit【包装规格】包装规格：4/

2、8/20人份【预期用途和简介】已知ABO血型系统中A亚型包括，A1、A2A3、Aw、Ax、Am&Ael等。A1亚型具有A1抗原、A抗原和H抗原，血清中含有抗B抗体；A2亚型则只有A抗原和H抗原，其血清中除含抗B抗体，还有少量抗A1抗体，在血清学实验中约25%能与A1红细胞发生的凝集反应。本试剂盒检样可为外周血、羊水、骨髓、组织、皮肤、血痕等提取的DNA，具有分型准确、快速、DNA需求少、针对中国人群设计优于同类进口试剂盒等优点。可用于个体识别，疑难配血，新生儿溶血病的产前和产后诊断、骨髓干细胞移植（血型转换期间）和器官移植，以及肿瘤或病毒感染后血型一

3、过性改变的基因识别。【试剂盒原理】根据Genebank公布的基因序列，通过针对A亚型基因不同碱基的替换或缺失设计特异性引物，设计该特异性碱基为正义链引物的3′末端，由于Taq酶缺乏3′-5′外切酶活性，与引物3′末端不相配的等位基因模板不能进行扩增，而与引物3′末端相配的等位基因顺利扩增；其中每孔已经包含有内参质控品为人类生长激素（HGH）的保守片段设计，内参扩增产物作为有效试验在电泳中显现。可识别A亚型基因包括：A2、A3、Aw、Ax、AM、Ael&O。【主要组成成分】1.试剂盒组成包装规格组份4人份8人份20人份ABO－A亚型引物板(2人份/板)

4、2块板4块板10块板浓缩dNTP-Buffer(440μl/支)2支4支10支A.ABO-A亚型引物板：每人份为46孔特异性引物。B.浓缩dNTPs-Buffer：包括200mMdNTPs、3.5mMMg2+、500 mM  KCl，100 mM  Tris-HCl，1% Triton X-100等，使用前用无菌去离子水稀释。*浓缩的dNTP-Buffer到货后，要根据每次的用量稀释后进行分装，不可反复冻融。*分装的浓缩Buffer在室温溶解后，其颜色应为粉红或浅紫色。如果浓缩Buffer溶解后Super007-004.19的颜色不是指定的颜色，则不

5、能使用。*如果在运输或储存中发现分装的浓缩Buffer中的盐已经沉淀了，要通过延长在室温（20-25℃）下的混匀时间来使其重新溶解。1.操作过程中用到的其他设备及试剂：-10μl-1000μl的微量移液器和相应规格量筒；-涡旋混匀器；-低速离心机；-加热板或微波炉——加热琼脂糖凝胶溶液；-电泳设备/电源——规格要求（100-150V/cm)；-紫外光成像仪或紫外光凝胶成像系统；-DNA扩增仪，PCR密封压力垫；-人类基因组DNA提取试剂盒；-Taq聚合酶(5units/μl)；-电泳染色剂；-1×TBE溶液；-琼脂糖（分子生物学级）；-液体石蜡（分析

6、纯）。【储存条件及有效期】1．储存条件：a）-20℃保存，避免反复冻融。b)室温操作。2．有效期：12个月，生产日期及有效期见试剂盒外包装。【适用仪器】DNA扩增仪、水平电泳槽、紫外/凝胶成像仪【样本要求】1.提取人类基因组DNA。2.DNA样品用1×TE(pH8.0)溶液溶解，DNA最佳浓度30-50ng/μl，A260/A280值为0.9-1.6。3.DNA样品不可重新溶解在含有钙螯合剂的溶解液中，例如大于0.5mM浓度的EDTA。4.DNA模板在4℃或-20℃保存，4℃以下运输。【电泳操作方法】Super007-004.19一、2.5%琼脂糖凝

7、胶的配制:1.2.5g琼脂糖加入100ml0.5×TBE（硼酸缓冲液），加热溶解后加入适量电泳染色剂，混匀。2.将适量凝胶溶液加入凝胶槽槽中，插入孔梳，前后水平移动均匀溶液，凝固后拔出孔梳。二、PCR（1.5h）循环参数：196℃/2min1cycle296℃/20sec，68℃/60sec5cycles396℃/20sec，65℃/45sec，72℃/30sec10cycles496℃/20sec，62℃/45sec，72℃/30sec15cycles572℃/1min1cycle64℃∽三、必须满足的试验条件：1.从－20℃冷冻室取出Taq聚合酶

8、，放置冰上使用。2.冷冻引物板放置室温解冻后立即使用。四、实验过程中的注意事项：1.PCR前后使用的加样器具