利用trizol试剂和液氮提取大鼠胰腺高质量总rna

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1、利用TRIzol试剂和液氮提取大鼠胰腺高质量总RNA作者：李冬民，任吴超，王璇，王飞苗，高玉，韩燕，宁启兰，宋天保，吕社民【摘要】　　目的建立胰腺高质量总RNA快速、经济、稳定的提取方法。方法应用TRIzol试剂和液氮提取大鼠胰腺总RNA，通过总RNA含量和A260/280比值的测定及10g/L非变性琼脂糖凝胶电泳评估总RNA的质量，并用RTPCR检测大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α淀粉酶和βactin的表达。结果利用TRIzol和液氮提取的大鼠胰腺总RNA量可达到3～6μg/mg胰腺组织，A260/280比值在1.

2、75～1.89之间。在10g/L非变性琼脂糖凝胶电泳时，均可见28S及18S条带，并且在28S、18S条带间可见明显的云雾状阴影。大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α淀粉酶、βactinRTPCR产物电泳结果显示均有清晰的条带。结论应用TRIzol试剂和液氮成功地提取了大鼠胰腺高质量的总RNA，后者可用于RTPCR研究。【关键词】大鼠胰腺；总RNA提取；TRIzol试剂；液氮　　ABSTRACT:ObjectiveToestablishaquick,economicalandreproduciblemethodforhi

3、ghqualityRNAextractionfrompancreas.MethodsWeutilizedTRIzolReagentandliquid11nitrogentoisolatetotalRNAfromtheratpancreas.TheRNAqualitywasdeterminedbydetectionofitscontentandopticdensity(A)at260/280nm,andelectrophoresisin1%nondenaturedagarosegel.Thenreversetranscri

4、ptionpolymerasechainreaction(RTPCR)wasperformedtodetectexpressionofthepancreasspecificgenes.ResultsThecontentofthetotalRNAextractedfromtheratpancreasreached3-6μg/mgpancreatictissues,andA260/280ratiowas1.75-1.89.ElectrophoresisofthetotalRNAshowed28Sand18SrRNAbands

5、withclearsmearbetweenthem.TheRTPCRproductsofpancreasspecificgenesincludinginsulin1,glucagon,αamylaseandhousekeepinggeneβactinallexhibitedclearbandson1%agarosegel,whichwerelocatedintheexpectedpositions,respectively.ConclusionTheseresultssuggestthatwehavesuccessfu

6、llyisolatedthehighqualityandintactRNAfromtheratpancreaswithTRIzolReagentandliquidnitrogen.TheextractedtotalRNAcanbeusedinRTPCRforpancreaticgeneexpression.　　KEYWORDS:ratpancreas;totalRNAextraction;TRIzolreagent;liquidnitrogen11　　1968年，COX用盐酸胍代替酚作为蛋白质变性剂，建立了分离纯化RN

7、A的方法。1979年，CHIRGWIN成功地利用异硫氰酸胍裂解、并以氯化铯为基质经超高速离心从富含核糖核酸酶的组织中，分离到未降解的RNA，并成为当时提取RNA的主要方法。1987年，CHOMCZYNSKI和SACCHI在联合应用异硫氰酸胍和酚提取RNA的基础上，建立了用酸性异硫氰酸胍酚氯仿抽提一步法分离RNA的方法，由于省略了以氯化铯为基质经超高速离心这一步骤，分离RNA的时间缩短为4h，不但使RNA的产量和纯度大大提高，而且还可从微量的细胞和组织中提取RNA。这种提取RNA的方法被广泛应用，并且被商业化。尽管目前已能成

8、功地从原核生物、真核生物的多种组织和细胞中提取RNA，但由于胰腺易自溶和富含内源性核糖核酸酶[1]，导致很难获得高质量的胰腺RNA，给研究胰腺组织的基因表达带来很大困难。我们经过反复试验，利用TRIzol试剂和液氮从大鼠胰腺组织中成功提取完整的RNA，可用于RTPCR、N