三七总皂苷对慢性肾缺血肾间质纤维化的防治作用

《三七总皂苷对慢性肾缺血肾间质纤维化的防治作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、三七总皂苷对慢性肾缺血肾间质纤维化的防治作用作者：谢纪青，金建生，付次双【摘要】目的观察三七总皂苷(PNS)对大鼠慢性肾缺血的保护作用及其机制。方法将大鼠随机分为假手术组，模型组及PNS治疗组。建立肾动脉狭窄肾缺血大鼠模型，分别于造模后第7，28，45，60天处死大鼠。观察肾间质病理形态学变化，应用免疫组织化学法检测肾小管间质αSMA在不同时间点的表达，放射免疫分析法检测血清IL2的含量、ELISA检测血清血小板源性生长因子(PDGF)的含量。结果模型组肾间质纤维化的程度，肾小管上皮细胞及间质α

2、SMA的表达和血清PDGF的含量在各时间点明显高于假手术组(P<0.01)，PNS治疗组上述各项指标在不同时间点明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。模型组血清IL2含量在7d时显著升高(P<0.01)，之后迅速下降到假手术组水平，45d时显著低于假手术组(P<0.05)。PNS治疗组血清IL2含量在7d时低于模型组(P<0.05)，其他时间点差别无统计学意义。结论PNS可能通过抑制肾小管间质细胞表型转化，降低细胞因子PDGF的水平和早期IL2的水平

3、减轻和改善慢性肾缺血肾间质纤维化。【关键词】三七皂甙;慢性病;肾;缺血;间质细胞;白细胞介素2;血小板源性生长因子;肌动蛋白类12近年来认为“慢性肾缺血”是肾纤维化的第一个信号，缺血作为一种独立因素导致肾小管间质损伤乃至肾间质纤维化为越来越多的学者重视[12]。在肾间质纤维化的过程中，细胞因子如血小板源性生长因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)和白细胞介素2(intreleukin，IL2)表达增加，肾小管上皮细胞转分化、α平滑肌肌动蛋白的表达均起了重

4、要的作用[34]。中药三七[主要成分三七总皂苷(panaxnotoginsengsaponins，PNS)]具有多种生物学效应。中药及其提取物对肾小管间质纤维化的作用近年来研究较多，效果比较肯定的是PNS。本实验通过制备慢性肾缺血大鼠模型，应用PNS进行早期干预，探讨细胞因子(PDGF、IL2)在慢性肾缺血中的作用及PNS对大鼠慢性肾缺血产生的保护作用及其可能的机制。　　1材料及方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物及分组雄性SD大鼠SPF级65只，体质量180～200g[上海斯莱克实验动物有

5、限责任公司，许可证号：SCXK(沪)20070005]。大鼠编号并按数字随机分组，实验分假手术组(n=21)，模型组(n=22)、PNS治疗组(n=22)。分组后大鼠分笼饲养，自由饮水、进食，适应环境3d。12　　1.1.2主要药物与试剂注射用血栓通(冻干)，主要成分为PNS(纯度>80%)，购自重庆药友制药有限公司(批准文号：国药准字Z20025652)，每瓶150mg，使用前按10mg∶1mL蒸馏水配制;PDGFBB夹心法酶联免疫吸附(enzymelinkedimmunosorbenta

6、ssay，ELISA)测定试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司(产品编号EK0485);兔抗大鼠αSMA抗体(产品编号RB9010)、即用型快速免疫组织化学MaxVisionTM试剂盒(产品编号KIT5004，福州迈新公司);IL2放射免疫试剂盒(产品编号C11PDA，北京北方生物技术研究所)。　　1.2方法　　1.2.1模型建立及标本收集模型组和PNS治疗组按照文献[5]的方法建立双侧肾动脉狭窄模型。假手术组仅分离双侧肾动脉而不结扎。造模后PNS治疗组每天腹腔注射1%的血栓通50mg·kg1，

7、假手术组和模型组同时给予等量生理盐水腹腔注射。造模后第7，14，28，45天每组分别选取5只大鼠处死，取血，离心分离血清，血清储存于-20℃冰箱中待测;处死大鼠后迅速取其左肾脏，4%甲醛固定，苏木素伊红染色(HE染色)、Masson染色观察病理变化，免疫组织化学观察肾小管间质αSMA表达。　　1.2.2肾脏常规病理检查行H12E染色、Masson染色，在光镜下观察肾组织形态学改变，间质纤维化半定量分析方法如下：Masson染色切片，每张切片观察10个不含肾小球和大血管的皮质视野，呈现为绿色的纤

8、维区域视为阳性目标，以阳性面积占统计场总面积的百分比作为肾小管间质的纤维化指数。标准为：0分，无病变;1分：染色面积≤25%;2分：25%<染色面积≤50%;3分：染色面积≥50%[6]。　　1.2.3免疫组织化学染色检测αSMA采用MaxVisionTM即用型快速免疫组织化学一步法检测αSMA的表达。一抗αSMA鼠单克隆抗体(1∶25稀释度)，严格按照试即用型快速免疫组化MaxVisionTM试剂盒说明书操作，光镜下观察阳性信号。在400倍