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1、一种新型的大鼠肺动脉高压模型【摘要】目的建立一种实用的肺动脉高压动物模型。方法采用左肺叶切除复合皮下注射野百合碱(MCT)的方法。动物切除左肺后1周皮下注射MCT,注射后第1,2,3,4周分别测量平均肺动脉压(mPAP)和平均右室压(mPRV)后取其右肺、心脏,计算：(1)肺中型(外径50~150μm)和小型(15~50μm)肌型动脉的相对中膜厚度(RMT)；(2)有完整内外两层弹力层的肌型动脉占肺小血管总数的百分比;(3)心脏称右室和左室加室间隔的质量,计算比值RV/(LV+S)。对照组仅行假手术,
2、1周后皮下注射生理盐水。结果与对照组比较,左肺切除复合MCT注射后4周mPAP明显增高[(48.19±3.33)vs(17.21±1.26)mmHg,P<0.001],右心室肥厚明显[(0.93±0.02)vs(0.27±0.01),P<0.001];光镜下,肺小血管肌化程度增强,RMT明显增加[中型(30.38±1.29)%vs(7.98±0.48)%;小型(25.06±0.99)%vs(6.18±0.42)%,P<0.01],肺血管密度明显减少[(3.68±0.13
3、)vs(7.65±0.25)个/mm2,P<0.01]。结论本方法建立的大鼠肺动脉高压模型是可行且实用的。【关键词】高血压肺性疾病模型动物肺动脉肺静脉6肺动脉高压(PAH)是一类严重威胁人类健康的疾病,根据病因分为原发性和继发性[1]。为了更好的研究其发病机制和治疗对策,笔者建立一新型的动物模型,报告如下。1材料与方法1.1模型建立及分组健康雄性SD大鼠(上海斯莱克斯实验动物有限公司)50只,体质量250～310g,随机等分为5组(每组10只):4个肺动脉高压组(PAH组),分别于4个时间点取
4、材。大鼠腹腔注射氯胺酮(50mg/kg)和硫喷妥钠(25mg/kg),麻醉后气管插管接小动物呼吸机(DH140型，浙医大医学仪器实验厂)行机械通气。取左前外侧切口,3~4肋间隙进胸后,按文献[2]方法切除左侧肺叶,待自主呼吸恢复后拔除气管导管。1周后按60mg/kg皮下注射野百合碱(MCT,美国SigmaChemicalCo.)。MCT注射后第1,2,3,4周测量血流动力学指标后留取标本,每个时间点10只大鼠。对照组行假手术。1周后皮下注射生理盐水,手术时及注射后4周重复测压,最后取材。1.2观测指
5、标血流动力学测量,包括平均肺动脉压(mPAP)、平均右室压(mPRV),开胸经右心室置管至肺动脉测压。右心室肥厚的检测:开胸取出心脏,分离右心室(RV)和左心室+室间隔(LV+S),滤纸吸干水分称质量。计算RV/(LV+S)比值。肺组织在负压中性甲醛中固定24h,石蜡切片。以醛品红染色,VanGieson复染。光镜下观察各组肺血管形态[2]。计算：(1)CMIAS图像处理与分析系统计算肺中型(外径50~150μm)和小型(外径15~50μ6m)肌型动脉的血管相对中膜厚度(RMT)。(2)具有完整内外两
6、层弹力层的肌型动脉占肺小血管总数的百分比,反映肺小血管的肌化程度。（3）单位面积肺血管密度（个/mm2)。1.3统计学处理数据均以x±s表示,采用单因素方差分析。2结果2.1一般情况PAH组40只大鼠,经左肺切除和MCT注射后4周共死亡4只,对照组无死亡。存活模型于MCT注射后4周明显消瘦,呼吸困难,胸、腹水形成,肝脏淤血、肿大,心脏增大,右室壁肥厚等心衰表现。2.2血流动力学PAH组不同时期的血流动力学曲线呈明显增高趋势,与对照组比较,注射MCT后4周、左肺叶切除后5周的mPRV、mPAP升高近2倍
7、,分别为(36.64±4.29),(12.07±1.34)和(48.19±3.33),(17.21±1.26)mmHg(1mmHg=113.3Pa,P<0.001),说明肺动脉高压形成(图1,表1)。2.3右心室肥厚度和肺血管形态学改变与对照组比较,PAH组左肺切除术加MCT注射后4周RV/(LV+S)值增加3倍[(0.93±0.02)vs(0.27±0.01),P<0.001];镜下可见血管内皮层明显增生,微血管瘤形成,细小肺血管闭塞、机化,直径在表1大鼠肺动脉平均压、右心室肥厚及肺血管
8、显微形态学指标50~150μ6m的肺动脉平滑肌层和内、外弹力纤维层均明显增厚,血管管腔减小。原本没有平滑肌层的直径为15~50μm的周围肺小动脉出现了平滑肌层。光镜下肺小血管肌化程度增强,RMT明显增加[中型(30.38±1.29)%vs(7.98±0.48)%;小型(25.06±0.99)%vs(6.18±0.42)%,P<0.01],肺血管密度则明显减少[(3.68±0.13)vs(7.65±0.25),个/mm2,P<0.01,图2,3
