mt1mmp在大肠癌中的表达及统计分析

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1、MT1MMP在大肠癌中的表达及统计分析【摘要】目的:探讨膜型基质金属蛋白酶1(membranetype1matrixmetalloproteinase，MT1MMP)在大肠癌中的表达及统计分析。方法:收集武汉大学人民医院病理科2004～2009年有完整临床和病理资料的大肠癌存档蜡块40例和5例癌旁组织，采用免疫组织化学SP法检测40例大肠癌和5例癌旁组织中MT1MMP的表达水平。采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统，对MT1MMP的表达进行定量分析，并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)

2、检验。结果：MT1MMP在大肠癌中呈高表达，癌旁组织中呈低表达。大肠癌与癌旁组织相比，差异有显著性(P<0.05)。结论：MT1MMP可能通过降解ECM参与肿瘤的侵袭和转移，检测MT1MMP的表达有助于预测肿瘤的转移,为治疗肿瘤提供了新的靶点。【关键词】大肠癌;MT1MMP;免疫组织化学;统计分析　近年来,随着人们生活水平的改善和生活习惯的改变,大肠癌的发病率在逐年增加。已由恶性肿瘤的第4位上升到第3位,发达国家如美国估计大肠癌死亡人数56290人,占全年癌症死亡总数的9.9%,仅次于肺而位居第2位[1]。但其发病机制尚不明确，目前认为是一个多步骤、多阶段及多基因参与的遗传

3、性疾病。10　　MT1MMPs最重要的作用是激活MMP2降解ECM成份，包括各种胶原、蛋白多糖和糖蛋白等，它们在许多生理、病理过程如胚胎发育、伤口愈合、血管形成、风湿性关节炎、纤维化等以及肿瘤的浸润和转移等过程中发挥着重要的作用[2，3]。　　本研究采用免疫组化和图像分析方法检测和分析了膜型基质金属蛋白酶1在大肠癌中的表达，为治疗肿瘤提供了新的靶点。　　1材料与方法　　1.1材料　　收集武汉大学人民医院病理科2004～2009年大肠癌存档蜡块40例(均经病理学证实为大肠癌)，其中男性20例，女性20例，平均年龄55.9岁,另取5例癌旁组织做对照。　　1.2方法　　1.2.1HE染色

4、常规取材、固定、脱水、透明、包埋、切片、HE染色及封片。　　1.2.2免疫组织化学SP法检测MT1MMP相关抗原10具体步骤：5μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01MPBS(pH7.4)漂洗5×3min;滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×5min;滴加生物素标记的二抗3

5、7℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01MPBS(pH7.4)漂洗3×3min;滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来水冲洗终止反应;苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为MT1MMP的阳性对照组。　　1.2.3免疫组织化学结果判断　　MT1MMP以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应，阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色

6、反应物。　　采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对MT1MMP的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400)10,测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。　　1.3统计学处理　　对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和q检验，检验水准α为0.05。　　2结果　　2.1MT1MMP的表达　　大肠癌细胞胞浆内

7、可见较多棕黄色颗粒,MT1MMP呈强阳性表达;癌旁组织细胞胞浆内可见少量的棕黄色颗粒，MT1MMP表达弱。图像分析结果显示：大肠癌MT1MMP的平均光密度为1.4728±0.0146;癌旁组织MT1MMP的平均光密度为0.5374±0.0095。大肠癌MT1MMP的阳性面积率为1.6577±0.0159;癌旁组织MT1MMP的阳性面积率为0.6410±0.0087。经q检验，大肠癌与癌旁组织之间，MT1MMP的平均光密