hbv pres1基因酵母表达载体的构建及表达

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1、HBVpreS1基因酵母表达载体的构建及表达作者：张曦，蔺淑梅，吴列秀，陈天艳，叶峰，赵英仁，张树林【摘要】　　目的构建HBVpreS1基因的酵母表达载体，探讨HBVpreS1蛋白的功能。方法以HBVayw亚型全长质粒PCP10为模板，聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)扩增HBVpreS1基因，克隆到pGEMT载体中命名为TpreS1，以NcoⅠ和MluⅠ双酶切TpreS1后回收与酵母表达载体pSos连接，对重组质粒进行序列测定后命名为pSospreS1，经醋酸锂法将其转化酵母菌cdc25(a

2、)，提取酵母蛋白质进行Western免疫印迹分析。结果成功构建了HBVpreS1基因的酵母表达载体，Western免疫印迹分析显示HBVpreS1基因在酵母细胞中正确表达。结论pSospreS1的构建为通过SOS招募系统(sosrecruitmentsystem,SRS)筛选与HBVpreS1蛋白相互作用的蛋白和进一步探讨HBVpreS1蛋白在HBV致病中的作用奠定了基础。【关键词】乙肝病毒preS1蛋白酵母表达载体　　ABSTRACT:ObjectiveToconstructtheyeastexpressionvectorofHB

3、VpreS1geneforinvestigatingthepotentialroleofpreS1proteininmediatingtheattachmentofHBVparticlestohumanhepatocytes.MethodsPCRwasperformedtoamplifyHBVpreS1genefromtheplasmidPCP10/HBVaywsubtypecontainingthe14wholefragmentofHBV,andthePCRproductwasclonedintopGEMTvectorandthen

4、namedTpreS1.HBVpreS1genewascutfromTpreS1byNcoⅠandMluⅠ,andclonedintoyeastexpressionplasmidpSos;thereconstructedplasmidwastestedbyautosequencingassayandnamedpSospreS1.pSospreS1wastransformedintoyeastcellcdc25(a)byLiAcmediatedtransformation,andtheyeastproteinwasisolate

5、dandanalyzedbyWesternblot.ResultsTheyeastexpressionvectorofHBVpreS1genewasconstructedsuccessfully,andthepresenceofHBVpreSlproteininyeastcellswasconfirmedbyWesternblotanalysis.ConclusionReconstructionofpSospreS1haslaidafoundationforbetterunderstandingofthemechanismofHBVp

6、reS1proteininviralendocytosisandishelpfulinseekingthepreS1relatedproteinthatissupposedtointeractwithpreS1proteininvitrobysosrecruitmentsystem.　　KEYWORDS:hepatitisBvirus;preS1protein;yeastexpressionvector　　乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,14HBV)是一种严重危害人类健康的重要病原体，其感染人体后可引起急、慢性乙型肝炎，

7、并与肝硬化、肝癌密切相关。和其他病毒一样，HBV也是通过与靶细胞表面的相应受体结合而进入细胞，从而实现对机体的感染。preS1区是HBV与肝细胞膜的直接结合位点。目前认为preS1蛋白与HBV的急性感染[1]、介导入胞[2]、病毒复制、转录和分泌有关。因此，研究HBVpreS1蛋白及其肝细胞受体，对进一步阐明乙型肝炎的发病机制具有重要的意义。为了进一步研究HBVpreS1蛋白的功能及其相关作用蛋白在HBV入胞中的作用，我们构建了HBVpreS1基因的酵母表达载体。　　1材料与方法　　1.1材料　　SOS招募系统(sosrecruitm

8、entsystem,SRS)包括cdc25酵母菌株，诱饵蛋白融合载体pSos，靶蛋白融合载体pMyr，阳性对照质粒pSosMAFB、pMyrMAFB、pMyrSB，阴性对照质粒pSosColⅠ、pMyrLa