fap和tgfβ1在肺腺癌中的表达及临床意义

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1、FAP和TGFβ1在肺腺癌中的表达及临床意义【摘要】目的研究成纤维细胞激活蛋白(FAP)和转化生长因子β1(TGFβ1)在肺腺癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测40例肺腺癌组织中FAP和TGFβ1表达情况,结合临床分期和病理分级进行分析。结果40例肺腺癌间质中FAP表达阳性率为90%,正常肺组织中无表达;FAP的表达与肺腺癌的临床分期有关,与病理分级无关。40例肺腺癌组织中TGFβ1表达阳性率87.5%,其表达与临床分期和病理分级有关。FAP与TGFβ1阳性表达呈正相关。结论FAP和TGFβ1共同作用于肺腺癌,促进癌细胞的增殖和浸润,与其恶性程度、临床分期相关,

2、联合检测有助于确定肺腺癌的恶性程度和估计预后及综合治疗方案的制定。【关键词】肺腺癌;成纤维细胞激活蛋白;转化生长因子肺腺癌多为周围型,生长缓慢,早期即可发生转移。近年来,肿瘤间质中的成纤维细胞被认为主动参与并调节肿瘤的演进。根据体外研究推测,在成纤维细胞上特异性表达的成纤维细胞激活蛋白(fibroblastactivationprotein,FAP)可能与肿瘤的生长侵袭有关〔1〕。在多种肿瘤组织中,转化生长因子β1(TGFβ1)表达增高,参与肿瘤增殖、分化、凋亡等病理生理过程,并可促进反应性肿瘤间质的形成〔2〕,因此,TGFβ101可能与FAP的表达有关。在肺腺癌中联合检测FAP和TGF

3、β1表达尚少有报道。本研究通过观察肺腺癌组织中FAP和TGFβ1的表达,分析其与肺腺癌临床病理参数间的相关性,为临床诊断、治疗、预后判定提供参考。  1材料与方法  1.1材料收集2007年2月至2008年12月本院胸外科手术切除的肺腺癌标本共40例,均有详细的临床资料、手术记录,术前均未接受放疗和化疗。所有标本均经病理证实为肺腺癌。患者年龄36~75岁,平均年龄57.8岁,其中男13例,女27例。根据UICC肺癌TNM分期,Ⅰ期10例,Ⅱ期9例,Ⅲ期21例。病理学分级Ⅰ级12例,Ⅱ级13例,Ⅲ级15例。另收集10例肺大疱及肺部慢性炎症手术切除组织标本作为正常对照组(其中肺大疱4例,慢性炎症

4、6例)。所有标本经10%福尔马林固定后,常规石蜡包埋和HE染色,5μm切片。  1.2主要试剂兔抗人多克隆FAP抗体、小鼠抗人TGFβ1单克隆抗体(购自Abcam公司),SP9001试剂盒、DAB试剂盒(购自北京中杉生物工程公司)。  1.3方法采用免疫组化SP法,严格按照试剂盒说明操作。PBS代替一抗做阴性对照,室温操作,切片脱蜡至蒸馏水,pH6.0的柠檬酸缓冲液微波修复10min,自然冷却至室温,用PBS浸泡5min×103次。3%H2O2封闭内源性过氧化物酶,室温20min,PBS浸泡5min×3次,加山羊血清50μl/片,室温封闭内源性生物素20min,甩除勿洗,滴加一抗50μl/

5、片(MMP21∶100;MMP91∶100),4℃过夜,PBS浸泡5min×3次。滴加二抗50μl/片,室温30min,PBS浸泡5min×3次。滴加辣根酶标记卵霉链白素50μl/片,室温30min,PBS浸泡5min×3次,DAB显色,显微镜下控制,自来水终止。苏木素复染,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中型树胶封片。  1.4染色结果判定标准随机选取5个高倍视野,每个视野计数100个肿瘤细胞或者间质细胞,计数阳性细胞的百分比。无染色计0分,弱染色(淡黄色)计1分,中染色(棕黄色)计2分,强染色(褐黄色)计3分;细胞阳性数<5%计0分,5%~25%计1分,26%~50%计2分,>5

6、0%计3分。上述两项计分相加得出总分,0分为阴性(-),1~2分为(+),3~4分为(),5~6分为()。  1.5统计学处理应用SPSS17.0统计软件,进行R×C列联表χ2检验及四格表关联性分析。  2结果  2.1FAP的表达10正常对照组肺组织中无阳性表达,在40例肺腺癌组织中表达阳性率为90%(36/40),主要表达在肺间质成纤维细胞胞质内,呈棕黄色,与病理分级无关,与临床分期相关。部分肿瘤细胞也有少量阳性表达。见表1。  2.2TGFβ1的表达正常对照组肺组织中无阳性表达,在肺腺癌组织中表达于癌细胞胞浆中,呈棕黄色,阳性率为87.5%(35/40),与病理分级和临床分期均有关

7、。见表1。表1FAP、TGFβ1在肺腺癌中的表达与病理、临床关系  2.3FAP和TGFβ1表达相关性40例肺腺癌组织中FAP、TGFβ1共阳性表达35例,共阴性表达4例,仅FAP阳性1例,仅TGFβ1阳性0例。经统计学分析,FAP与TGFβ1表达呈正相关(r=0.882,P=0.000),即随着一个因子表达的增强另一个因子表达也增强。  3讨论  实体瘤(包括上皮细胞癌),直径超过1~

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