呼吸道病毒九联检技术讲解-课件

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1、呼吸道病毒九联检技术九项呼吸道感染病原体IgM抗体采用间接免疫荧光法（IFA）同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM抗体用于呼吸道感染疾病的辅助诊断。可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒副流感病毒1、2和3型。.检测原理间接免疫荧光法IFA基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应用免疫荧光显微镜观察结果

2、。试剂盒组成及用途简明操作程序结果判断有效性判断每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应为：阳性对照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核、胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。阴性对照：军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。阳性结果荧光图谱阴性结果

3、荧光图谱样本结果判断阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。样本结果判断阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。临床灵敏度和特异性病原体对比方法样本数量阳性符合率阴性符合率嗜肺军团菌IFA8294.4%98.4%

4、肺炎支原体ELISA6296.8%100.0%Q热立克次体IFA74100.0%97.6%肺炎衣原体IFA61100.0%98.0%腺病毒ELISA7485.7%97.0%呼吸道合胞病毒ELISA9793.8%100.0%甲型流感病毒ELISA4694.1%96.4%乙型流感病毒ELISA40100.0%96.4%副流感病毒ELISA36100.0%96.3%对所需检测的样本要求仅适用与于检测人血清。其血液采集需由专业人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技术，以保持样本的完整性。血清样本采集后如不在8小时内检测应2～8ºC冷藏，如7天内不

5、检测，则应冷冻（-20ºC）保存。不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM。不要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒要离心使之澄清。呼吸道感染病原体IgG/M抗体检测在感染早期采集的样本可能是检测不到IgG的，在这种情况下可采用IgM检测，或者在14-21天后采集第二个血清样本，并与原标本同时检测来确定是否发生血清转换。在初次感染和再次感染的过程中，IgG和IgM抗体有不同的表现方式：初次感染时，几乎在所有的情况下IgM和IgG均出现（IgM早于IgG出现）；而再次感染时，可能不出现IgM，因此IgG的检测是唯一有用的诊断方法。

6、在许多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG，而IgM一般情况下仅在感染后2—3个月存在于血清中，因此是近期感染的一个有效标志物。再次，对与婴儿来说，因为出生前母体的IgG会被动的传递给了胎儿，所以对6个月以下的婴儿IgM检测是更为有用感染标志物。