济南大学毕业设计(论文)外文资料翻译参考格式(理工科类)2012

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1、生物化学期刊VOL.281,NO.17,pp.11755–11760.存在于透明质酸合酶家族中的两种膜内极性残基的突变能改变透明质酸产物的大小卡玛里库玛丽‡,布鲁斯把根斯透斯‡,安德里亚诺夫艾克‡,保罗格尔‡§1来自于生物化学和分子生物学领域及关于医学的糖生物学俄克拉荷马州中心和俄克拉荷州健康科学中心大学摘要我们识别了两种在链球菌不同细胞膜结构域的透明质酸存在两种保守的极性氨基酸，如存在于膜结构域2的赖氨酸和存在于膜结构域4的谷氨酸。在真核生物的透明质酸合酶中，谷氨酸的位置一般非常相似，并且赖氨酸由保守的极性谷氨酰胺所代

2、替。为了评估是否赖氨酸和谷氨酸作用于或影响于链球菌透明质酸合酶的活性，我们调查了把赖氨酸替换成精氨酸或者谷氨酸，还有谷氨酸替换成赖氨酸、精氨酸或谷氨酸的影响。包含赖氨酸和谷氨酸被替换的双开关的变异体在大肠杆菌细胞膜内得到表达和分布。尽管SeHAS（E327Q）和seHAS(E327K)低水平表达，然而seHAS（E327D）和Lys48表达比较好。这些特定的酶活性（相对于野生型）对于K48R和K48E突变体分别为17%和7%,并且对于E327Q和E327D突变体分别为26%和38%。相反，seHAS（E327K）只表现出

3、野生型酶活性的0.16%，但是当把Lys转变成Glu之后，seHAs（E327K）的酶活性能够提高46倍。根据色谱层析分离方法加上多角度激光散射，所有的突变体合成了平均摩尔质量比野生型（3.6MDa）小的透明质酸，最小的HA（0.6MDa）来自于seHAS（E327K，K48E）和seHAS（K48E）。这个结果表明了存在于MD4的Glu对于seHAS的稳定性是非常重要的物质，并且这些残基涉及到能够使HAS合成摩尔质量非常大的HA。关键词透明质酸合酶；透明质酸；赖氨酸；谷氨酸；SeHAS；HA产物大小；大肠杆菌；1934

4、年，Meyer和Palmer发表文献之后，透明质酸无所不在，经常大量存在于脊椎动物组织的细胞外基质组分中，尤其存在于软骨、皮肤和玻璃体液中。HA也可以由多种致病细菌产生。HA是一条线性非分支交替地多聚分子，由β（1，4)-N-乙酰葡糖胺和β（1，3）-D-葡糖醛酸构成。传统的HA是非常多分散的。经典的最小分子≤100KPa,最大的分子接近于10MPa。HA是由HAS合成。自从1993年第一次HASgene出现于链球菌GroupA之后，相似的HASgene已经在其它细菌、蛙类、人、其它的哺乳动物以及甚至在一些干扰藻类（10

5、~14）的病毒里面。这些大于20的HAS组成了一个拥有共同特点和AA序列相同或相似区域的蛋白家族。这种存在于巴氏杆菌的酶只是一种HAS但并不属于这个大家族，因为它在其结构、拓扑结构和作用机制的不同。尽管在结构上简单，HA对于脊椎动物的正常发育是必要的，并在正常的健康和各种疾病中扮演着非常重要的功能。很多研究已经达成共识：HA14不仅仅是一种结构分子，并且是一种能够调整包括形成心脏垫、血管再生术及多种抗药性等复杂细胞行为的细胞信号。令人惊讶的是，很多这些细胞信号作用是由较小HA的调节，而不是较大MMHA。例如，血管再生（1

6、6，17）被较小的HA所刺激，而不是较大的HA，并且能活化巨噬细胞，从而达到促进表达大量只反应成小HA的基因。小分子HA片段通过特定细胞表面受体来刺激信号连续传递给靶细胞，。因此，在特定的糖蛋白CD44（18）中，小分子HA和大分子HA可能对其有不同的生物学功能。逐渐达成的共识表明，特定生物反应可能很好依赖于特定大小网状的HA。还发现了，尽管他们催化相同的反应，但是不同的HASs产生HA的大小不同，一般为（20̴22）。例如，来自于能表达HAS1或HAS3细胞的膜合成0.2̴~2.0MDa的HA，然而大于2MDa的HA分

7、子由来自于能表达HAS2细胞膜上合成的。如果相同的结果适用于活的人体细胞，由HAS1、HAS2或HAS3合成的实际HA大小分布对于特定的生物学功能是不同的。这些人类HASgeng的表达方式在不同的成年和胚胎组织中是截然不同的。就像在胚胎发育过程中暂时的表达模式一样，不同大小的HA由三种HAS同工酶在不同时期和特定组织中合成。因此，这些HA可能涉及不同的生理学功能。当前，通过能调整HAS活性的细胞和影响有HAS产生HA大小的因素，人们对理解这些作用机理产生很大的兴趣。这是第一次关于由大小分离色谱法及多角度激光散射方法分析由

8、包含野生型或突变型的细胞膜合成HA的摩尔质量的报道。在近来的研究中，我们检测了两种保守并且处于不同膜结构域的AA，其对于HAS功能至关重要。这些结果显示了，它们涉及到HAS能合成高摩尔质量HA的能力，并且支持了一种假说：MD2和MD4足够的近为这两种残基的直接作用于HA的相互作用提供可能。1.位于HAS膜结构域的极性