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《激光共聚焦显微镜原理 激光共聚焦显微镜的原理和应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、激光共聚焦显微镜原理激光共聚焦显微镜的原理和应用・232・军医进修学院学报1996Sept;17(3)激光共聚焦显微镜的原理和应用李 楠 王黎明 杨 军关键词 激光;显微镜;原理和作用中国图书资料分类法分类号 R318.51的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,这样得到的共聚焦图象是标本的光学横断面,克服了普通显微镜图象模糊的缺点。在显微镜的载物台上加一个微量步进马达,可使载物台上下步进移动,最小步进距离为的0.19激光共聚焦显微镜原理激光共聚焦显微镜的原理和应用・2
2、32・军医进修学院学报1996Sept;17(3)激光共聚焦显微镜的原理和应用李 楠 王黎明 杨 军关键词 激光;显微镜;原理和作用中国图书资料分类法分类号 R318.51的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,这样得到的共聚焦图象是标本的光学横断面,克服了普通显微镜图象模糊的缺点。在显微镜的载物台上加一个微量步进马达,可使载物台上下步进移动,最小步进距离为的0.19激光共聚焦显微镜原理激光共聚焦显微镜的原理和应用・232・军医进修学院学报1996Sept;17(3)激
3、光共聚焦显微镜的原理和应用李 楠 王黎明 杨 军关键词 激光;显微镜;原理和作用中国图书资料分类法分类号 R318.51的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,这样得到的共聚焦图象是标本的光学横断面,克服了普通显微镜图象模糊的缺点。在显微镜的载物台上加一个微量步进马达,可使载物台上下步进移动,最小步进距离为的0.19激光共聚焦显微镜原理激光共聚焦显微镜的原理和应用・232・军医进修学院学报1996Sept;17(3)激光共聚焦显微镜的原理和应用李 楠 王黎明 杨 军关键
4、词 激光;显微镜;原理和作用中国图书资料分类法分类号 R318.51的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,这样得到的共聚焦图象是标本的光学横断面,克服了普通显微镜图象模糊的缺点。在显微镜的载物台上加一个微量步进马达,可使载物台上下步进移动,最小步进距离为的0.19m,则细胞或组织各个横断面的图象都能清楚地显示,实现了“光学切片”的目的,这就是“细胞CT”名称的由来。1.2 激光共聚焦显微成像仪的图像处理功能1.2.1 “细胞CT”功能 通过狭缝扫描技术将我们对细胞的研
5、究由多层迭加影像推进到真正的平面影像水平,使图像更加清晰,从而为分子细胞生物学的深入研究拓宽了视野。1.2.2 三维成像与细胞内部结构图像相结合的功能 激光共聚焦显微成像仪可以将断层图像与三维重建图像有机的结合起来,不但能揭示细胞内部的结构和提供细胞的长、宽、厚、断层面积、细胞体积等参数,而且可以给人以三维立体的概念。例如:可以使细胞旋转起来从而能随意观察细胞各个侧面的表面结构。1.2.3 将形态学、生理学与分子细胞生物学的研究相互结合 利用激光共聚集显微成像仪不但可以观察细胞形态的动态变化,而且用适当的荧光探
6、针可以观察细胞内部的生物化学变化。如细胞内游离Ca2+、pH值及其它细胞内离子的实时测定。荧光原位杂交的杂交点观测和定量分析。1.3 激光共聚焦显微成像仪的细胞生物学功能1.3.1 粘附细胞分选技术 Ultima型激光共聚焦显微成像仪是目前世界上唯一能对粘附细胞进行分选的仪器,而这种不改变细胞周围培, 激光共聚焦显微镜是80年代发展起来的一项划时代意义的高科技新产品,它是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置,利用计算机进行图象处理,使用紫外或可见光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象,在
7、亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值,膜电位等生理信号及细胞形态的变化,成为形态学,分子细胞生物学,神经科学,药理学,遗传学等领域中新一代强有力的研究工具。1994年在姜泗长院士的提议下,我院引进了目前世界上档次最高,功能最全的美国Meridian公司的产品:Acas系列Ultima型和扫描速度最快的Insight型两台激光共聚焦仪。仪器自1995年5月份到货安装以来,已为我院7个科室的10个课题所应用,目前主要开展的研究内容有:(1)细胞内游离钙的实时监测;(2)细胞通讯的研究;(3)细胞形态学的研究。1 基
8、本原理和功能1.1 基本原理 传统的光学显微镜使用的是场光源,标本上每一点的图象都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰;激光共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面上的每一点扫描,标本上的被照射点,在探测针孔处成像,由探测针孔后的光电倍增管9(PMT)或冷电耦器件(cCCD)逐点或逐线接收,迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图象。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭,军
