2014分子生物学课件重点总结(一)

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1、2014级五（2）许馨引物：是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。Ct值：是PCR扩增过程中，扩增产物(荧光信号）到达阈值时所经过的扩增循环次数基因诊断：应用分子生物学技术,从DNA/RNA水平检测分析致病基因的存在,变异和表达状态从而对疾病作出诊断的技术 RFLP：利用特定限制性识别位点进行基因分析的方法基因诊断常用的技术有哪些？ 1.核酸分子杂交技术（hybridization） 2.等位基因特异寡核苷酸探针(allelesp

2、ecificoligonucleotide,ASO) 3.DNA限制性长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)分析 4.PCR-PCR/单链构象多态性分析（PCR-Single-strandconformationpolymorphism，PCR-SSCP） 5.DNA测序（DNAsequence） .6DNA芯片技术（DNAchip） 基因治疗：将外源性正常基因导入到病变细胞或体细胞中，以置换或增补缺陷基因的功能，从而达到治疗遗传性疾病或获得性疾病的目的。 基因治

3、疗的策略有哪些? 一、针对致病基因而言：（1）基因修正（genecorrection） 对于致病基因中的异常碱基进行精确修复，使其恢复正常功能； （2）基因替代（genereplacement） 用正常基因在原位替换致病基因，使细胞DNA完全恢复正常状态； （3）基因增强（geneaugmentation） 将正常基因导入患者体细胞内，使其整合到染色体中一起表达，以补偿缺陷基因的功能，但致病基因未去除； （4）基因表达调节（modulation） 指将特定的反义核酸、RNA干扰或核酶等技术抑制目的基因表达从而消除致病基因的

4、作用。 二、针对非致病基因而言：（1）自杀基因 这种基因导入受体细胞后可产生一种酶，它可将原无细胞毒性或低毒药物前体转化为细胞毒物质，将细胞受体细胞杀死，这种基因被称为“自杀基因”。自杀基因导入肿瘤细胞后，可将肿瘤细胞杀死。但对正常细胞则无伤害作用。 （2）免疫基因治疗 将某些细胞因子（IL-2、GM-CSF等）基因导入肿瘤患者体内，以增强患者的抵抗力。 （3）耐药基因治疗 72014级五（2）许馨在肿瘤化疗过程中，把产生抗药物毒性的基因导入患者体内，从而使患者能耐受更大剂量的化疗。 （4）More…… 基因治疗的基本程序

5、： 1.目的基因的选择和获取 2.目的基因与转运载体结合 3.靶细胞的确认 4.载体携带外源基因进入细胞 5.外源基因的整合 6.外源基因的表达及检测 7.治疗作用及稳定性、安全性评价克隆：一种无性繁殖技术。指一个亲本细胞产生成千上万个相同细胞组成的群体的过程。DNA克隆：应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获

6、得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA(recombinantDNA)。基因工程(geneticengineering)：有目的的通过基因克隆技术，人为的操作改造基因，以改变生物的遗传性状的系列过程。 基因克隆的技术路线：1.分：分离制备目的DNA片段和载体 2.切：目的DNA与载体的剪切 3.接：目的DNA与载体的连接 4.转：重组DNA分子转化宿主细胞 5.筛：筛选阳性克隆，大量扩增 基因克隆的基本原理：1.目的基因的获取2.载体的选择和构建3.外源基因与载体的连接4.DNA导入受体菌5.重组体的筛选6.克隆基

7、因的表达限制性核酸内切酶（限制酶）：限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease,RE)是识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。目的基因的分离：72014级五（2）许馨1、直接从染色体DNA中分离 2、人工合成3、通过mRNA反转录合成cDNA4、从基因组DNA文库获取目的基因 5、从cDNA文库获取目的基因6、PCR扩增目的基因 7、索取载体：能携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的一类DNA分子。质粒：是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。大小约为数千碱基对

8、。常有1-3个抗药性基因，以利于筛选。质粒的特性：⑴存在于细菌等细胞质中⑵双链环状DNA分子⑶大约3～10Kb⑷具有自主复制和转录能力⑸不能独立存活⑹在子细胞中保持恒定的拷贝数，并表达其遗传信息转化（transformation）：质粒或以其为载体的重组子导入细菌并得到表达的过程。 转染（transfe