tcid50的测定方法

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1、实验病毒感染力的滴定（TCID50的测定）滴度：在半定量或定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱。滴度（抗体的多少）越高，受传染的机会就越小。一、实验目的了解病毒感染力测定的几种常用方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。二、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50(50%lethaldose)：用动物或鸡胚来检测半数鸡胚感染量EID50(egg50%infectivedose)：用鸡胚来检测半数细胞培养物

2、感染量TCID50（50%tissuecultureinfectivedose)：用细胞来检测蚀斑形成单位（plaqueformingunit，PFU）：用细胞来检测三、材料1、长满单层的细胞1瓶2、胰酶、吸球、吸管、生长液3、96孔细胞培养板4、加样器、枪头5、病毒液（PRV）四、TCID50的操作步骤1、在离心管中用MEM将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-6。2、将稀释好的病毒接种到96孔培养板中，每一稀释度接种一纵排，共8孔，每孔接种100µl。3、在每孔加入细胞悬液100µl，使细胞量达到

3、2~3×105个/ml。4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。（100µl生长液+100µl细胞悬液）5、逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。6、结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法。五、TCID50的计算方法1、Reed-Muench两氏法病毒液稀释度出现CPE孔数无CPE孔数累计出现CPE孔所占的%CPE孔数无CPE孔数10-180270100（27/27）10-280190100（19/19）10-37111191.6（11/12）10-4354640（4/10）10-5

4、171130.7（1/14）10-6080210（0/21）（CPE：Cytopathiceffect细胞病变影响）距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数） ＝（91.6-50）/（91.6-40）＝0.8lgTCID50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数=0.8×(-1)+(-3)=-3.8TCID50=10-3.8/0.1ml含义：将该病毒稀释103.8接种100µl可使50%的细胞发生病变。2、Karber法病毒液

5、稀释度出现CPE的孔数出现CPE孔的比率10-188/8=110-288/8=110-377/8=0.87510-433/8=0.37510-511/8=0.12510-600/8=0lgTCID50=L-D(S-0.5)L：最高稀释度的对数D：稀释度对数之间的差S：阳性孔比率总和lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)=-3.875TCID50=10-3.875/0.1ml含义：将该病毒稀释103.875接种100µl可使50%的细胞发生病变。