专题1---《基因工程知识点汇总》

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1、专题1基因工程知识点汇总1．1DNA重组技术的基本工具一、基因工程的原理：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外和，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在水平上进行设计和施工的，因此又叫做。二、限制性核酸内切酶1、切割DNA的工具是，又称。2、这类酶在生物体内能将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保持细胞原有的遗传信息。3、由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶（简称限制酶）。4、DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段，末

2、端通常有两种形式，即和。三、DNA连接酶——“分子缝合针”根据DNA连接酶的来源不同，可以将它分为两类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为DNA连接酶。DNA连接酶只能将连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。另一类是从分离出来的，称为T4DNA连接酶。T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的，又可以“缝合”双链DNA片段的，但连接之间的效率比较低。四、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”1、基因操作过程中使用载体两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。2、现在通常使用的载体是

3、，它是一种相对分子质量较小、独立于拟核DNA之外的环状DNA，有的细菌中有一个，有的细菌中有多个。3、质粒通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以复制，也可整合细菌拟核DNA中，随着拟核DNA的复制而复制。4、其他载体还有和等。5、作为载体必须具备以下条件：①能够在宿主细胞中；②具有多个，供外源基因连接；③具有某些，便于进行筛选，如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。1．2基因工程的基本操作程序一、目的基因的获取：1、目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的。2．获取目的基因的方法（1）从基因文库中获取目的基因①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多，导

4、人受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。②种类基因组文库：含有一种生物的基因cDNA文库：含有一种生物的基因③目的基因的获取：根据基因的有关信息：基因的序列、基因在上的位置、基因的产物mRNA、基因的产物蛋白质等特性获取目的基因。（2）利用PCR技术扩增目的基因。①PCR：是一项在生物体外特定DNA片段的核酸合成技术。②原理：③前提：有一段已知目的基因的序列。以便根据这一序列合成。④过程：目的基因DNA受热形成，与结合，然后在______的作用下进行延伸成DNA。方式：指数扩增=2n（n为扩增循环的次数）（3）人工合成法：基因较小，核苷酸序

5、列已知，可以人工合成。二、基因表达载体的构建1、表达载体的组成：目的基因+++标记基因等。2、启动子：位于基因的，它是结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。3、终止子：位于基因的，终止。4、表达载体的目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且给下一代；使目的基因____和发挥作用。5、标记基因：受体细胞是否含有目的基因。6、不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。三、将目的基因导入受体细胞（一）转化：目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和的过程。（二）方法1、将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌转化法①农杆菌特点：易感染

6、植物和裸子植物，对___________植物没有感染力；Ti质粒的可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。②转化：目的基因插人农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。（2）基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。（3）花粉管通道法：2．将目的基因导入动物细胞（1）方法：技术。（2）操作程序：目的基因表达载体→取卵（受精卵）→显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性动物的_________________________内发育→新性状动物。3．将目的基因导人微生物细胞（1）原核生物特点

7、：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。（2）转化：处理细胞→细胞→表达载体与感受态细胞混合→___细胞吸收DNA分子。四、目的基因的检测与鉴定1．检测（1）方法：标记了的、抗原抗体杂交。（2）内容①检测转基因生物染色体的DNA是否插入。②检测目的基因是否转录。③检测目的基因是否翻译成。2．鉴定：鉴定，如抗虫棉的抗虫、抗病鉴定等。1．3基因工程的应用一、植物基因工程的成果：植物基因工程技术主要用于提高农作物的能力，以及改良农作物的和利用植物生产药物等方面。（一）抗虫转基因植物1．杀虫基因种类：Bt毒蛋白基因、抑制剂基因、抑制剂基因、植物