雷公藤甲素对aa大鼠核因子κb受体激活剂的配基表达的影响

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1、华中科技大学同济医学院颀一｜：学位论文色结果采用ＨＰＩＡＳ一１０００型全自动彩色图像分析系统（ｔＯ济医科大学千屏影像公司１测量阳性染色部位平均吸光度测定【３Ｊ。１．５骨密度检测及骨侵蚀病理积分骨密度仪测定大鼠胫骨关节端骨密度（ＢＭＤ，ｇ／ｃｍ２）。关节骨侵蚀病理积分标准及判定方法参考文献【３…，０：正常；１：皮质骨或小梁骨或软骨下骨少数部位有轻度侵蚀：２：皮质骨或小梁骨或软骨下骨较多部位出现侵蚀：３：皮质骨或小梁骨或软骨下骨多个部位骨侵蚀严重；４：骨侵蚀严重，皮质骨或软骨下骨被侵蚀穿透，或小梁骨断裂。１．６统计学处理－数据采用均数±标准差表示，运

2、用ＳＰＳＳｌｌ．５统计软件进行方差分析。Ｐ＜０．０５为差异有显著性意义。２结果２．１大鼠关节体积和病理学改变大鼠接种ＣＦＡ后９天左右出现继发性关节炎，２４天左右红、肿等炎症表现达到高峰。接种ＣＦＡ２４天后，ＡＡ组关节病理切片可见增生性滑膜炎和炎性细胞浸润，软骨和关节端皮质骨、软骨下骨及小梁骨出现骨侵蚀。ＴＰ组和ＭＴＸ组大鼠关节肿胀体积明显小于ＡＡ组，滑膜炎性病理改变较ＡＡ组轻，骨侵蚀程度低于ＡＡ组。２．２各组大鼠骨密度及骨侵蚀积分见表１，ＡＡ组大鼠骨密度明显低于正常组（Ｐ＜Ｏ．０１），ＴＰ组和ＭＴＸ组骨密度高于ＡＡ组（Ｐ＜０．叭），骨侵蚀积分低于

3、ＡＡ组（Ｐ＜Ｏ．０１）。表１各组大鼠骨密度及骨侵蚀积分（Ｘ±Ｓ）组别正常组ＡＡ组ＴＰ组ＭＴＸ组１１９９９９骨密度（ｇ／ｃｍ２）０．２１３±０．００８０．１９０＋０．０１７’Ｏ．２０１±０．０１１“Ｏ．１９８＿＋０．０１３“骨侵蚀积分０３．４±０．７’１．６±０．４”１．９－１－０．５”ｓ与正常组比较Ｐ＜０．０１，”与ＡＡ组比较Ｐ＜０．０１２．３ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ染色结果见表２，ＡＡ大鼠关节滑膜、软骨下骨及小梁骨区域ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ蛋白表达高于正常大鼠（Ｐ＜０．０１）。ＴＰ组大鼠关节滑膜（Ｐ＜Ｏ．０１）、软骨下骨及小梁骨区（Ｐ＜Ｏ．０５）

4、ＲＡＮＫＬ蛋白表达水平低于ＡＡ组。ＴＰ组大鼠软骨下骨及小粱６华中科技大学同济医学院碗二ｌ：学位论文骨区域ＯＰＧ与ＡＡ组无差异（Ｐ＞０．０５），滑膜ＯＰＧ表达量低于模型组（Ｐ＜Ｏ．０５）。（见图１，２）。幽１模型组软骨下骨、骨小粱区ＲＡＮＫＬ表达图２．ＴＰ组软骨下骨、骨小梁区ＲＡＮＫＬ表达ＤＡＢＸ１００．ＤＡＢＸ１００．表２各组大鼠关节中ＯＰＧ和ＲＡＮＫＬ表达的平均吸光度＊与正常组比较Ｐ＜０．０１。”与ＡＡ组比较Ｐ＜０．０５。Ａ与ＡＡ组比较Ｐ＜０．０１。３讨论类风湿关节炎的局灶性骨侵蚀包括血管翳对关节边缘的皮质骨和关节软骨的侵蚀、软骨下骨和

5、关节远端小梁骨的局灶性侵蚀，多项研究证明ＲＡ关节局灶性骨侵蚀处存在激活的破骨细胞，并且局灶性骨侵蚀主要破骨细胞所介导ｔｓ！。ＲＡＮＫＬ为ＴＮＦ超家族新成员，有膜型和分泌型两种，其主要生理功能之一为促进破骨细胞分化激活及增强其活性，抑制破骨细胞凋亡，可表达于成骨细胞：骨髓基质细胞、Ｔ淋巴细胞、滑膜细胞等。研究发现，作为诱导破骨细胞分化激活的关键因素，ＲＡＮＫＬ在炎性关滑膜，骨组织中表达增多是ＲＡ关节骨质丢失的主要原因之一【３】。ＯＰＧ为成骨细胞所表达，也可见于滑膜细胞，作为ＲＡＮＫＬ的圈套受体能够阻断ＲＡＮＫＬ的生理功能，抑制关节中破骨细胞分化激活

6、所致的骨侵蚀，在ＲＡ关节中可见表达不足或相对不足【６】ｏ故而抑制ＲＡ关节中ＲＡＮＫＬ表达、促进ＯＰＧ表达，则成为防治ＲＡ的关节骨侵蚀的有效途径。７Ｃ－中科技大学碗济医学皖碗：｜：学位论文传统中药雷公藤为治疗ＲＡ疗效肯定的药物，雷公藤甲素为其单一有效提取成分，属二萜内酯类化合物。初步动物实验表明其能延缓胶原诱导关节炎模型发病时间，降低其发病率，抑制关节滑膜炎症和骨组织损伤【７】。我们先前的研究已表明雷公藤甲素能够通过诱导滑膜成纤维细胞凋亡抑制血管翳形成１８Ｊ，并且可降低关节中可促进破骨细胞分化激活的炎症因子ＴＮＦ．ａ水平ＩＪ：ｌ而具有抑制ＲＡ关节骨

7、损伤的所用。但尚不清楚雷公藤甲素是否能通过抑制ＲＡＮＫＬ表达、促进ＯＰＧ表达而减缓破骨细胞所介导的ＲＡ关节局灶性骨侵蚀。故本实验进一步探讨雷公藤甲素对关节炎大鼠关节中ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ表达的影响。在本实验中发现佐剂性关节炎大鼠病程高峰期（接种ＣＦＡ后２４天），关节软骨、皮质骨、软骨下骨、小梁骨均受到不同程度侵蚀，胫骨关节端密度下降。滑膜侵害软骨和皮质骨处以及软骨下骨和小梁骨局部侵蚀处ＲＡＮＫＬ异常表达增高，与Ｂｏｌｏｎ等观察到破骨细胞在佐剂性关节炎骨侵蚀处增多的结果相符１２Ｊ，表明ＲＡＮＫＬ同样在佐剂性关节炎骨侵蚀起着重要的作用。在佐剂性关节炎起

8、病时ｆ接种ＣＦＡ后９天）即予以雷公藤甲素和甲氨蝶呤治疗，在其病程高峰期能够显著减缓关节局灶性骨侵蚀和骨密度下降，并且抑制ＲＡＮＫＬ在滑膜