致病性弧菌增菌培养基和选择性鉴别培养基的研究

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1、密级:公开中图分类号:TS207.4④声浮二商砍事硕士学位论文论文题目:作者性名:学科专业:研究方向:指导教师:提交日期:二。一0年一月DissertationSubmittedtoZhejiangGongshangUniversityforMaster，5DegreeofEngineeringstudesonEnrichmentMediumandSeleetiveDil…ferentialMediumofPathogenie巧brioAuthor:KeminShenMajor:FoodScienceSuPerviso

2、r:Prof.GuangyingZhaoJan.2010CollegeofFoodSeieneeandBiotechnologyEngineering，ZhejiangGongshangUniversityHangzhou，310035，P.R.China浙江工商大学硕士学位论文致病性弧菌增菌培养基和选择性鉴别培养基的研究摘要致病性弧菌(pathogenic巧brio)属于弧菌属(genus巧brio)，有12个种，包括霍乱弧菌(巧brioeholerae)、副溶血性弧菌(巧brio那rahaemolyric。)、创伤

3、弧菌(巧briovuln沪eus)、海鱼弧菌(巧briodamsela)、拟态弧菌(巧briomi，ieus)、辛辛那提弧菌(巧brioc万nc万nnariensis)、梅氏弧菌(Vibriometschnikovi万)、霍利斯弧菌(巧brioholl才sae)、河流弧菌(Vibrioj7uvialis)、弗尼斯弧菌(巧briofurnissii)、溶藻弧菌(巧brioa勿n口lylicus)和鳖鱼弧菌(巧bri口carchariae)。致病性弧菌是影响水产品安全的重要因素，通常存在于近海海水、海底沉积物、浮游生物、海

4、产品(鱼类和贝类)中，是夏秋季沿海地区引发食物中毒的首要病原菌。人类多因食入未煮熟的海产品或污染此菌的盐渍食物而感染;主要症状为腹痛、腹泻、呕吐和发热等。如果不及时治疗，可能会危急生命。选择性鉴别培养基是在生化反应的基础上开发的技术，它将传统的细菌分离与生化反应有机的结合起来，使得检测结果直观，易于观察辨别，且具有低成本、特异性强、灵敏度高和检测快速、操作方便等优点。选择性鉴别培养基是国内外微生物检测发展的一个主要发展方向。目前，致病性弧菌仅有副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌具有选择性鉴别培养基，其它致病性弧菌尚没有。

5、本研究的目的和意义是设计和研制其它致病性弧菌的选择性鉴别培养基，以满足和储备日益严格的食品安全标准和不同检测条件的需求。浙江工商大学硕士学位论文本论文主要围绕以下几个方面开展了一些工作:1致病性弧菌增菌培养基及培养条件的改进研究本试验对弧菌增菌培养基(VEM)及培养条件进行改进研究，经过优化，获得一套适用于致病性弧菌增菌的VEM及培养条件。试验结果表明:以副溶血性弧菌为代表，用vEM在(36士l)“c+摇床120r/min+2层牛皮纸封口条件下增菌培养，在相同时间内，其增菌菌液浓度是GB厅4789.7一2008中规定方

6、法的碱性蛋白炼水(APw)增菌菌液浓度的1.8士0.6倍;对12中致病性弧菌进行的增菌培养试验结果表明，VEM能有效促进12种致病性弧菌的生长繁殖。VEM组成为:混合蛋白陈2%(胰蛋白陈:鱼蛋白陈为1:3)、酵母浸膏0.2%、Nacl3%、pHS.6。这为后续工作的顺利开展奠定了基础。2创伤弧菌选择性鉴别培养基的研制本试验以创伤弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵抗力为基础，设计研制了创伤弧菌选择性鉴别培养基(vvDM)。试验中对VvDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。结果显示:VvDM对

7、创伤弧菌具有较好的选择性和特异性;用vvDM在39OC培养16h佗4h，创伤弧菌菌落为黄色;其它各种弧菌及非弧菌属致病菌菌落呈绿色或未形成有效的可见菌落;vvDM对创伤弧菌的出菌效率与嗜盐琼脂相比为(92.42士3.43)%;检出限为10’c创mL;因此，vvDM对海产品中创伤弧菌分离鉴别与检测是可行的，且具有操作简便、经济、结果易于观察等优点。3拟态弧菌选择性鉴别培养基的研究本试验以拟态弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵抗力为基础，设计研制了拟态弧菌选择性鉴别培养基(VInDM)。试验中对浙江工商大

8、学硕士学位论文VlnDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。结果显示:37℃培养24h时，VlnDM对拟态弧菌具有较好的选择性和特异性;拟态弧菌菌落为绿色或蓝绿色，其它弧菌菌落呈黄色或没有有效菌落形成;VmDM对拟态弧菌的出菌效率与嗜盐琼脂相比为(90.1士6.8)%;检出限为IOZc创mL。因此，VI五DM对海产品中拟