那他霉素发酵工艺的研究(本科毕业)

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1、那他霉素发酵工艺的研究摘要：该实验以钠他霉素为菌种进行一系列的发酵，通过其单因素实验和正交实验，来确定了其最佳的培养基配方及发酵条件:葡萄糖3.5%，大豆蛋白胨1.85%，酵母粉0.40%，初始pH值7.0，接种3%，50mL放入的250mL的三角瓶中，25℃，转速300r/min，发酵120h。最终在此配方和发酵条件下，纳他霉素产量可达到1.2g/L。关键字：纳他霉素培养基发酵优化前言纳他霉素（Natamycin），也称游链霉素，是一种天然的多烯大环内酯类抗生素[1]。它是由纳塔尔链霉菌（StreptomycesNatalensis）经过发酵得到的一种次级代谢产物，能够有效抑制酵母菌和

2、丝状真菌的生长及真菌毒素的产生，作为一种无毒害、低剂量的生物防腐剂，已被广泛应用于食品防腐和真菌引起的疾病的治疗[2]。目前，国际上已许可使用的生物防腐剂仅为乳酸链球菌素（Nisin）、纳他霉素（Natamycin）及聚赖氨酸（ε-poly-lysine）三种[3]。我国目前允许使用的仅为乳酸链球菌素和纳他霉素。钠他霉素作为一种新型的防腐剂，因为有其高效的杀菌效果以及无毒无害的安全保证，因此被各个行业所亲睐[4]。近几年在全球经济的发展迅速，人们的生活水平普遍提高了，因此对那些无毒无害的食品越来越亲睐，从而促进了各个行业开始寻找这种防腐剂。又因为钠他霉素高效的杀菌效果以及无毒无害的安全，

3、所以钠他霉素就孕育而生。目前有30多个国家已经将钠他霉素作为天然食品添加剂和防腐剂使用。1材料与方法1．1材料1.1．1菌种生产菌株:褐黄抱链霉菌S.giLvosPoreus，ATCC13326。1.1.2主要药品无水葡萄糖分析纯上海生工生物工程有限公司麦芽浸粉RT天津市化学试剂一厂琼脂粉生化试剂大五化学株式公社牛肉蛋白胨微生物培养基用北京化学试剂公司大豆蛋白胨生化试剂北京市海淀区微生物培养基制品厂酵母浸粉生化试剂成都市彭县丽春化学厂糊精分析纯北京市海淀区微生物培养基制品厂可溶性淀粉分析纯天津市化学试剂批发部经销麦芽糖生化试剂天津市化学试剂一厂蔗糖分析纯天津化学试剂批发部监制氯化钠分析纯

4、天津市化学试剂一厂MgSO4分析纯天津市塘沽化学试剂厂HCl分析纯天津化学试剂部监制磷酸分析纯天津化学试剂三厂1.1.3主要仪器LDS一10型离心机上海安亭科学仪器厂TGL一16B高速台式离心机北京医用离心机厂电热恒温培养箱湖北省黄石市医疗器械厂DFG801型电热鼓风机天津式实验仪器厂HKCB一3型恒控磁力搅拌器格兰仕电子分析天平瑞士超纯水器北京普析通用仪器有限责任公司微波炉温州市医疗电器厂超净工作台苏州净化设备厂1.1.4培养基活化液体培养基(g/L):葡萄糖15克蛋白胨5克麦芽浸粉8克酵母粉7克PH7.0斜面保存培养基(g/L):葡萄糖15克酵母粉4克蛋白胨5克琼脂粉10克麦芽浸粉2

5、克PH7.O分离培养基(g/L):葡萄糖20克蛋白胨5克酵母粉3克麦芽浸粉2克琼脂粉10克PH7.0种子培养基(g/L):葡萄糖20克蛋白胨6克酵母粉4克NaCl8克PH7.0发酵培养基(g几):大豆蛋白分离物20克酵母粉3克PH7.0葡萄糖(50%葡萄糖单独灭菌)7克以上培养基灭菌条件:115℃，灭菌30min1.2试验方法1.2.1菌种的活化从锥形瓶中接种一环装有10mL液体的活化培养基接种于25OmL的三角瓶中，于25℃，300r/min振荡培养48h，转接于保藏斜面，25℃恒温培养120h，当斜面几乎完全被孢子覆盖，这事放入冰箱(4℃)中保存以备用。1.2.2菌种的分离取0.3m

6、l孢子悬浮液接种于装有20ml培养基的平板上，连涂5块平板，25℃恒温培养120h。然后根据菌落的形态，大小等因素来挑选不同典型形态的单菌落，用D=10mm的打孔器打10个孔，将单菌落琼脂块放入D=100mm的培养皿中，并将平板于25℃恒温培养24h，当发现边缘出现清晰的抑菌圈时，这时就用抗生素效价仪测定抑菌圈得大小[5]。挑选抑菌圈较大的菌落并转接于保藏斜面，25℃恒温培养120h。1.2.3种子培养吸取5ml孢子悬浮液接种于装有50ml的种子培养基的250mL三角瓶中，25℃，300r/min振荡培养48h，使菌体能迅速到达生长期。1.2.4摇瓶发酵培养以3%的接种量接种种子液到装有

7、50ml的液量的250ml三角瓶中，25℃、300r/min回转式摇床发酵120h。1.2.5生产菌的测定-干重法[6]首先先将滤纸放于100℃的烘箱下烘至恒重，称重后并记下数据然后在放入布氏漏斗。取10ml的发酵液，3000r/min离心30min，把上面的清液倒掉收集其沉淀，用无菌水洗涤两次，将洗涤后的沉淀洗入布氏漏斗中抽滤，将滤纸和菌体在50℃的烘箱中干燥至恒重，称量并计算菌体的干重。2结果与讨论2．1培养基的优化2.1.1种