肺癌组织中mirnas的表达及其与oct4、klf4的关系

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1、肺癌组织中miRNAs的表达及其与Oct4、Klf4的关系　　[摘要]目的研究肺癌组织中miRNAs的表达及其与Oct4、Kruppel样因子（Klf4）的关系。方法选择2013年4月～2014年8月期间在南京军区福州总医院接受肺癌根治术的50例患者进行研究，收集肺癌组织和癌旁正常组织，检测Oct4、Klf4的mRNA含量以及miR-335、miR-339、miR-361、miR-200c、miR-148、miR-29的表达量，分析Oct4、Klf4的mRNA含量与miRNAs表达量的关系。结果肺癌组织中Oct4的mRNA含量（±）高于癌旁正常组织的（±），

2、t=，P　　[关键词]肺癌；microRNA；Oct4；Kruppel样因子　　[中图分类号][文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2016）01（b）-0100-04　　[Abstract]ObjectiveTostudytheexpressionofmiRNAsinlungcanceranditscorrelationwithOct4，Klf4.Methods50casesofpatientsreceivedlungresectioninFuzhouGeneralHospitalofNanjingMilitaryCommandfromApril

3、2013toAugust2014wereenrolled.Lungcancertissueandadjacentnormoltissueswerecollected.ThenmRNAcontentsofOct4，Klf4andmiR-335，miR-339，miR-361，miR-200，，miR-148，miR-29expressionlevelsweredetected，thecorrelationbetweenmRNAcontentsofOct4，Klf4andmiRNAsexpressionwereanalyzed.ResultsmRNAconten

4、tsofOct4（±）inlungcancerwerehigherthanthose（±）inadjacentnormaltissue（t=，P　　 [Keywords]Lungcancer；MicroRNA；Oct4；Klf4　　肺癌是我国发病率最高的恶性肿瘤，手术切除仍是临床治疗肺癌最有效的方式，辅助以术后放化疗、生物靶向治疗等措施能够有效地延长患者的生存时间。尽管如此，患者在接受综合治疗措施后的复发率仍较高，复发病灶对放化疗以及生物靶向药物不敏感会导致病情迅速发展，最终造成死亡。目前，肺癌发病的潜在分子机制仍未阐明。Oct4和Kruppel样因子4（K

5、lf4）是参与细胞增殖调控的两类转录因子，与多种恶性肿瘤的发生相关[1-2]，检测肺癌组织中Oct4和Klf4的表达量、探索上游调控机制有助于阐明肺癌发生的分子机制。近年来有研究显示，miRNAs表达异常与肺癌的发生密切相关并且能够通过与mRNA3’UTR区域结合来调节基因表达，可能参与Oct4和Klf4表达的调控[3-4]。本研究分析了肺癌组织中miRNAs表达量及其与Oct4、Klf4表达量的关系。　　1资料与方法　　研究对象　　选择2013年4月～2014年8月在南京军区福州总医院胸外科接受肺癌根治术的50例患者进行研究，所有患者经病理学检查诊断为肺癌

6、，包括男32例、女18例，年龄43～67岁，平均（±）岁。本研究获得医院伦理委员会批准后告知研究事项和手术风险，取得患者知情同意后进行肺癌根治术。术中取肺癌组织和癌旁正常组织，经病理检查确认肺癌组织和癌旁正常组织的性质后用于下一步研究。　　研究材料　　RNA提取试剂盒、RNA反转录试剂盒以及荧光定量PCR试剂盒来自日本Takara公司；miRNA提取试剂盒、miRNA反转录试剂盒以及荧光定量PCR试剂盒来自德国Qigen公司；PCR仪来自美国ABI公司。　　研究方法　　RNA抽提和检测方法取肺癌组织和癌旁组织，采用RNA提取试剂盒抽提组织中的总RNA，采用R

7、NA反转录试剂盒、通过OligoDT18将mRNA反转录为cDNA，而后进行荧光定量PCR反应，扩增条件如下：95℃变性，15s，特异性退火温度，15s，72℃延伸25s，重复40个循环。扩增基因包括Oct4、Klf4，扩增引物及特异性退火温度见表1。　　miRNA抽提和检测方法取肺癌组织和癌旁组织，采用miRNA提取试剂盒抽提组织中的总miRNA，采用RNA反转录试剂盒对miRNA进行加尾处理、取加尾样本进行反转录并得到miRNA对应的cDNA；而后进行荧光定量PCR反应，退火温度参照试剂盒均为60℃，扩增条件如下：95℃变性，15s，60℃退火和延伸，3

8、5s，重复40个循环。扩增基因包括miR-335、m