苏州大学医学院医学二系教案 课程 临床免疫学和免疫检验

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1、苏州大学医学院医学二系教案课程临床免疫学和免疫检验授课人石怡珍授课时间2010年10月27日专业医学检验年级2007班级学生人数30教材临床免疫学和免疫检验主编王兰兰出版单位人民卫生出版社出版日期2007年7月章节第七、十章教材页数第69-80页至第109-118页题目第七章放射免疫技术、第十章化学发光免疫分析技术目的要求1.掌握放射免疫技术的基本类型及原理2.掌握标记物制备类型，熟悉制备和纯化方法3.掌握标记物及抗血清的鉴定参数。4.掌握放射免疫分析测定方法，了解测定设备。5.了解放射免疫技术的临床应用

2、。6．掌握化学发光免疫分析类型特点及原理7．熟悉临床应用授课内容、安排、方法、重点难点及时间分配一、讲授内容：1.放射免疫技术的特点2.放射免疫分析3.免疫放射分析4.放射免疫技术的应用5．化学发光免疫分析技术类型及原理、临床应用二、方法：讲课采用Powerpoint多媒体幻灯的形式。三、重点难点：重点讲解放射免疫分析原理，标准曲线质控参数，免疫放射原理及其与放射免疫的区别，各类化学发光免疫分析的特点。难点讲解标记物制备类型，制备和纯化方法四、时间分配：1.放射免疫技术的特点20分钟2.放射免疫分析20分

3、钟3.免疫放射分析10分钟4.放射免疫技术的应用10分钟5．化学发光免疫分析60分钟教媒具体及课多件方法：Powerpoint多媒体幻灯具体教学内容历史：1960年美国的Berson和Yalow将核技术与免疫学技术相结合建立了放射免疫分析法，并首先用于测定血浆胰岛素浓度，由于该法对医学的巨大贡献，1977年Yalow获得了Nobel奖。第一节放射免疫技术的特点1.放射免疫技术的基本类型：放射免疫分析是体外放射分析最有代表性的一类检测技术。另外还有放射受体分析、蛋白质竞争结合分析、放射酶促分析等。免疫放射分

4、析、受体放射分析是典型的非竞争性体外放射分析。此外。还有酶的放射化学测定、酶的激活剂或抑制剂测定法等。2.常用的放射性核素：125I3.标记物制备类型，制备：方法1）直接法：最常用于肽类、蛋白质、酶的碘化标记，采用化学或酶促氧化反应直接将125I结合于被标记物分子中酪氨酸残基或组胺残基上。2）间接法：联接标记最常用。主要用于小分子化合物的标记。4.标记物的纯化1）.凝胶过滤法（SephadexG-50柱层析分离较常用）2）.离子交换层析法3）.聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）4）.高效液相色谱法（HPLC

5、）5.标记物的鉴定1）放射化学纯度，一般要求大于95%2）免疫活性3）比放射性：单位化学量标记物中所含的放射性强度。第二节放射免疫分析1.放免分析竞争结合基本原理及定义：是以抗原抗体的免疫反应为基础，利用待测抗原与定量的标记抗原同有限量的特异性抗体竞争性结合，以放射性测量为微量定量手段，获得待测生物样品中抗原浓度的技术标准曲线：如果采用系列已知浓度的标准品在相同条件下进行分析，测得各标准点的结合率(B/F)，以结合率对标准品量作图，可以得到一条标准曲线。通过这条标准曲线即可查得未知浓度的待测样品的含量。标

6、准曲线常用数据处理方法：log-logit坐标系及线性回归法是目前公认比较好的拟合方法，它是以结合率的logit值为纵坐标，以标准品浓度的对数值为横坐标，制成散点图，然后用最小二乘法对各散点进行直线回归，得出回归方程，获得标准曲线，可用计算机或计算器完成。标准曲线质控参数：B0%:30%-50%,有效期内稳定;NSB%:<5%-10%;最低浓度管结合率和最高浓度管结合率之差>30%;标准曲线直线回归的a,b值稳定,r>0.99;ED25,ED50,ED75稳定常用B与F分离的方法：免疫分离法：利用抗原抗体

7、结合形成的复合物化学分离法：PEG等物理分离法：电泳、层析、离子交换、活性炭或树脂吸附等生物分离法：葡萄球菌A蛋白（SPA）固相分离法：包被试管、塑料球、磁化分离技术等。第三节免疫放射分析1.免疫放射分析的基本原理：也是以抗原抗体的免疫反应为基础，不同的是放射性核素标记的是抗体，以过量标记抗体直接与待测抗原结合。因此，溶液中放射性与待测物的浓度呈正相关。为非竞争性结合分析。Ag＋Ab*(过量)===Ag.Ab*＋Ab*方法：单位点法双位点法(Ab1为McAb)双位点法(Ab2为McAb)标记第三抗体法2.

8、IRMA与RIA的异同点：均为以抗原抗体的免疫反应为基础，测定对象为物质的抗原；RIA为竞争性，标记物为抗原结合部分放射性与待测抗原浓度呈负相关,在直角坐标系呈曲线为了产生竞争,抗体仅使用结合50%抗原的量,故灵敏度较免放法低IRMA为非竞争性，标记的是抗体，且为过量（高滴度）结合部分放射性与待测抗原浓度呈正相关，因抗体为过量，抗原全量参与反应，反应更为迅速，灵敏度高标准曲线工作范围大由于使用单抗，其特异性好免疫放射分析仅适用