冷冻切片技术实验及冷冻切片机的基本操作

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1、冷冻切片技术实验及冷冻切片机的基本操作作者：未知来源：生物秀时间：2006-8-6实验仪器大全实验试剂大全实验目的1掌握冷冻切片的方法2掌握冷冻切片的用途实验原理冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度并通过冰起支撑作用来进行切片的一种方法。速冻可减小冰晶直径，避免组织细胞损伤。制冷压缩机佛里昂制冷、半导体温差电制冷 [1] [2] 下一页实验材料新鲜动物肝脏实验方法1准备 将仪器打开，样品台温度调至-40℃。2取材  组织必须新鲜，尽可能不经水洗。取材时应避免组织挤压，防止人为假象。样品大小5X5X3mm。3 速冻  将样品放在样品台上，样品四周加

2、水加固，冷冻5－10min.4 切片 升高温度至-15℃（视样品而定），约5min后开始切片，厚度6-15um。5 制片 将切片直接放在载波片上或先放在盛水（固定液）的培养皿中再转移到载波片上。6 染色观察 吸干水，加一滴苏木精，加盖玻片，用显微镜观察。7 记录 将观察的结果绘于实验报告上，整理自己用过的物品。附：切片温度的设定脑   -12℃肝脏  -14℃肾脏  -16℃肌肉  -20℃皮肤 -25℃多脂肪组织  -30℃经过固定的组织  -5℃～-10℃附：快速永久制片1固定70％乙醇5～10min；2水洗2min；3苏木精染色5～10min；4

3、脱色 0.1%HCl至变红；5蓝化0.1NaOH变蓝；6水洗 5～10s；7脱水70%2min；8伊红染色5～10min；9脱水100%乙醇2minX2；10透明二甲苯3min；11封片 中性树胶封片。 冷冻切片机的基本操作：1.在使用前2小时开启电源，并将温度设定在-25℃;2.将适当大小和厚度的标本放在蘑菇状杯上，加上冷冻蜡，夹在切片机的固定槽内;3.准备好玻片，选择切片厚度，摇动手柄，即可做成切片;4.将做成的切片小心的吸附在玻璃片上;5.使用结束后关闭电源,清洁腔体和擦干水气,做好使用记录。6.为让水蒸气蒸发，请不要马上关闭切片机的上盖移门，应

4、到第二天再关。如需详细说明，请借阅说明书。1.2石蜡切片用于免疫组化技术的石蜡切片制备与常规略有不同：①脱水、透明等过程应在4℃下进行，以尽量减少组织抗原的损失；②组织块大小应＜2cm×1.5cm×0.2cm，使组织充分脱水、透明、浸蜡；浸蜡、包埋过程中，石蜡应保持在60℃以下，以熔点低的软蜡较好。组织块脱水、透明和浸蜡时间可参考下表：表1组织块处理时间目前我校形态学部配备有全套自动脱水仪，一系列过程都可实现自动化，有意要做石蜡切片的同学可与王亚琴老师联系。