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1、第7卷第3期中国实验方剂学杂志Vol.7,No.32001年6月ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulaeJun.,2001四逆汤中附子甘草配伍规律研究33陈建萍,谭炳炎,吴伟康,张敏生,李礼娟,韩超(广州中山医科大学,广州 510089) 摘要:目的:观察四逆汤中药附子、甘草配伍前后主要成分的含量变化。方法:采用串联质谱ESI2MSPMS及HPLC测定附子中的主要成分在配伍前后含量变化,采用薄层扫描测定甘草中的主要成分甘草酸在配伍前后的含量变化。结果:附
2、子与甘草配伍后乌头类生物碱和甘草酸的含量均明显降低。关键词:附子;甘草;ESI2MSPMS,HPLC,TLC中图分类号:R28411 文献标识码:B 文章编号:100529903(2001)0320016202 四逆汤(SD)源于张仲景的《伤寒论》,是治疗少定容至1:1,得供试液,备用。各取供试液5ml,用氨阴虚寒证的代表方剂,临床主要用于少阴病,四肢逆水调pH值等于9,溶液用乙醚提取2次,每次10ml,冷,下利清谷,脉微细无力等症。在既往的研究发挥干,渣用少量二氯甲烷溶解,移入1ml容量瓶中,现,SD对冠心病心肌缺
3、血具有良好的保护作用,本加二氯甲烷至刻度,摇匀,备用。研究在此基础上,以SD方药为研究对象,从方药配212 对照品溶液的制备 精密称取乌头碱210mg,伍的君、臣、佐、使关系出发,以君药附子为核心,对次乌头碱213mg,新乌头碱115mg,置小烧杯中,加入其中药味附子、甘草组成的方药进行药物成分定性二氯甲烷溶解后,移入10ml容量瓶中,加入二氯甲定量相关性分析,对SD方药中主要药味配伍进行规烷至刻度摇匀,即得。律性的研究。213 定性分析1 仪器和试剂21311 乌头类生物碱的薄层分析 将上述点样液API2365电喷雾离子
4、化2质谱质谱(ESI2MSPMS)各取10μl,点于同一块硅胶G薄层板上。用氯仿:甲联用仪(Perkinelmer2SCIEX公司);Waters公司高效醇(9:1)为展开系统,加适量的氨水饱和展开缸,上液相色谱仪,486检测器,510泵,810色谱工作站;日行展开,展距13～15cm,碘蒸气为显色剂进行显色。本岛津CS2930型双波长薄层扫描仪。21312 甘草的薄层层析 各取供试液各10μl,点于 中药来源:附子(黑顺片)(Aconitiumcarmichaeli同一块硅胶GF254薄层板上,用正丁醇:冰醋酸:水De
5、bx.)、甘草(GlycyrrhizaeuralensisFisch)、干姜(Zin2(6:1:3)为展开系统。紫外灯下显色。giberofficinaleRosc.)(均购于广州药材公司,经广州214 定量分析中药大学药鉴教研室鉴定);甘草浸膏用上述甘草原21411 附子配伍前后乌头类生物碱的含量变化药材自制;甘草酸单铵盐对照品(中国药品生物检定扫描方式:Q1扫描(ESIPMS)正离子;Q3扫描分所);硅胶GF254(青岛海洋化工厂);其他化学试剂均解CID谱。为分析纯。样品处理:取Tab1中的方药2ml,用等量的甲醇2
6、 方法与结果稀释,过滤后,用水稀释10倍,直接用spring泵进样,211 样品溶液的制备 分别称取附子(50g),附子30μlPmin,计算机数据处理。用对照品扫描确定所测(50g)+甘草(20g),附子(50g),甘草(20g),于4个烧化学成分的离子峰,得到分子量值及顺序信息。杯中,加入8倍量的水,水浴煮沸2h,过滤,滤液浓MSPMS分析:用串联质谱ESI2MSPMS将对照品缩,醇沉,取醇层,回收乙醇将附子及甘草煎剂混合,及各样品溶液进行测定,结果见表1。上述方法形成附子单煎剂,附子与甘草的合煎剂以及附子甘草单煎后再
7、混合,此三种溶液均以附子量收稿日期:2000202212·16·©1995-2005TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.第7卷第3期中国实验方剂学杂志Vol.7,No.32001年6月ChineseJournalofExperimentalTraditionalMedicalFormulaeJun.,2001表1SD方药不同配伍中乌头类生物碱的MRM分析结果划酸的成份均存在。样品结果乌头碱次乌头碱312 从表1可知,附子甘草合煎剂、附子、甘草单独均值43
8、81333530提取后再混合,其中乌头类生物碱的含量显著降低。附子RSD16135%21215%且附子中乌头碱的稳定性相对差些,说明两味药物浓度(μgPml)3171619相互作用可能产生不溶性的物质(因为乌头碱与甘均值55127131133草中的甘草酸可能形成络合物)从而减少乌头碱、次附+甘RSD26
