银杏叶提取物EGB对CCl4肝损伤小鼠的MDA含量以及SOD活力的影响毕业论文.doc

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1、银杏叶提取物EGB对CCl4肝损伤小鼠的MDA含量以及SOD活力的影响毕业论文1材料与方法1.1实验材料1.1.1药物1.1.1.1银杏叶提取物（黄铜类）江苏同源堂生物工程公司批号：临用时用0.1%吐温—80，蒸馏水配制成10mg/kg，40,mg/kg，160mg/kg低中高三个浓度。1.1.1.2联苯双酯（15mg/丸）浙江医药股份有限公司新昌制药厂批号：080603临用时用蒸馏水配制成0.12%混悬液取80丸*15mg/丸=120mg（120mg→100ml水=0.12%）1.1.1.3CCl4北京化工厂提供批号：080121临用前

2、用大豆油制成0.1%的四氯化碳油溶液。1.1.2试剂ALT试剂盒批号：20100316；AST试剂盒批号：20100317；SOD试剂盒批号：20100317；MDA试剂盒批号：20100317，均为南京建成生物工程研究所生产。总蛋白测定试剂盒北京北化康泰临床试剂有限公司批号：200910281.1.3实验动物小白鼠清洁级昆明种♀♂兼用，体重24+2g，北京医学科学院实验动物研究所提供，许可证号：SCXK（京）2004-00011.1.4仪器1.1.4.1电子称：ACS-A-JJ交直流电子计价秤，中航第一集团太原航空仪表有限公司生产。1.

3、1.4.2721分光光度计，上海第三分析仪器厂生产。1.1.4.3.HH-60数显恒温搅拌水箱，苏州威尔实验用品有限公司生产。1.1.4.4FZQ-2型漩涡混合器，竞速泰县医疗器械厂1.1.4.5电子天平，BP310P德国赛多利斯生产。1.1.4.6离心机（KDC-1044低速离心机），科大创新股份有限公司中佳分公司生产。1.2实验分组与处理1.2.1分组1.2.1.1空白对照组1.2.1.20.1%吐温对照组1.2.1.3模型对照组1.2.1.4联苯双酯阳性对照300mg/kg1.2.1.5银杏叶提取物低浓度10mg/kg1.2.1.6

4、银杏叶提取物中浓度40mg/kg1.2.1.7银杏叶提取物高浓度160mg/kg1.2.2处理3月15日，随即分为七组后，灌胃给药（0.25ml/10g体重），空白对照组、模型组给予等量蒸馏水，吐温对照组给予等量吐温，连续灌胃七天，灌胃前称一次体重，灌胃后第二天再次称重，然后第四天三次称重，称重后，除空白对照组及吐温对照组外，各组动物均腹腔注射0.1%CCl4溶液10ml/kg（取CCl430µl→30ml大豆油），第七天灌胃给药后停食。16小时后解剖取出肝脏、脾。-11-1.3称肝脏、脾脱臼处死小鼠，剖取肝脏、脾称重。1.4肝组织中脂质

5、过氧化指标及抗氧化活性的测定　1.4.1MDA含量测定方式MDA含量测定方式是在国内外众多测试方法的基础上改进的一种微量、快速、简便、准确、对操作人员健康无损害的测试方法。通过测试可反映出血清（浆）、乳汁等细胞外液、红细胞、白细胞、培养细胞以及各种动植物的细胞水平及亚细胞水平的脂质过氧化物的量。1.4.1.1丙二醛（MDA）的测定意义：机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸（PUFA），引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基可内过氧基，以及新的氧自

6、由基等。脂质过氧化作用不公把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸（PUFA）的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而

7、MDA的高低又间接的反应了机本细胞受自由基攻击的严重程度，通过SOD与MDA的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。1.4.1.2MDA试剂盒测试原理：过氧化脂质降狗解产物中的丙二醛（MDA）可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在532nm处有最大吸收峰。因底物为硫代巴比妥（TBA）所以此法称TBA法。1.4.1.3测试所需仪器设备可见光分光光度计，可调到95℃左右的恒温水浴箱（或者铝锅内放几个去掉盖子的易拉罐，将罐壁及底部穿数十个孔，以便水的进入，用来代替水浴箱。），离心机。1.4.1.4100T试剂盒组成与配制

8、1.4.1.4.1试剂一：液体20ml×1瓶，室温保存。（天冷时会凝固，每次测试前适当水浴加温以加速溶解，直至透明方可应用）。1.4.1.4.2试剂二：液体12ml×1瓶，用时每瓶加340ml