丹溪痛风加减方对msu致家兔急性痛风性关节炎的防治作用

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1、丹溪痛风加减方对MSU致家兔急性痛风性关节炎的防治作用李宝龙，韩玉生，刘旭，周忠光*(黑龙江中医药大学,哈尔滨　150040)摘要　目的:观察丹溪痛风加减方对微晶型尿酸钠(MSU)诱导的兔急性痛风性关节炎的防治作用,并探讨其可能作用机制。方法:采用MSU诱导家兔痛风性关节炎模型,在致炎5h后对关节液进行白细胞计数,并测定其细胞因子和炎症因子含量,同时进行病理组织学检查。结果:丹溪痛风加减方高中剂量灌胃可显著降低兔关节液白细胞数以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),前列腺素E2(PGE2),IL-1β,IL-8水平,减轻关节

2、及软组织水肿和炎细胞浸润、变性坏死。结论:丹溪痛风加减方能明显改善MSU诱导的兔痛风性关节炎,其机制可能是抑制炎症细胞趋化和激活,抑制炎症因子、细胞因子的合成与释放。关键词:丹溪痛风加减方;痛风性关节炎;微晶型尿酸钠;细胞因子1　材料1.1　药物与试剂　丹溪痛风加减方（苍术、黄柏、防己、威灵仙、制南星、泽泻、车前子各15g,川芎、桃仁、红花、羌活、桂枝各10g,土茯苓25g,萆薢20g），水煎浓缩2g/ml浓度待用,临用前用0.8%CMC-Na稀释。秋水仙碱片,昆明制药集团,批号20071051；尿酸,Sigma公司产品

3、;IL-1β,IL-8ELISA检测试剂盒,武汉博士德产品；TNF-α、PGE2放免试剂盒,北京东亚。1.2　动物　雄性家兔,体重(2-3)kg,购于黑龙江中医药大学动物试验中心。在实验室正常饲养1周后进行试验。1.3　主要仪器　FA2004型电子天平(上海精密仪器厂);BIO-RAD550型酶标仪(美国伯乐公司)。2　方法2.1　尿酸钠结晶及尿酸钠溶液的制备[1]　取2g尿酸加入400mL沸水中,用1mol/LNaOH溶液调pH值至7.4,再加热至95℃,室温冷却并轻轻搅拌,4℃放置4-6h过滤,得微晶型尿酸钠,80℃

4、灭菌。用前称取1000mg尿酸钠,充分研磨,加无菌生理盐水20ml配成50g/L的混悬液。2.2　动物给药与造模　雄性家兔,随机分6组(n=8):正常组,模型组,丹溪痛风加减方高、中、低剂量组(12,6,3g/kg),灌胃给药,每天1次,连续7d;对照组给等量的0.8%CMC-Na溶液:阳性对照组(秋水仙碱0.3mg/kg),从第4天开始ig给药,末次给药1h后,除正常组关节腔注射无菌生理盐水外,每只家兔右侧膝关节腔内注射0.5mlMSU(50g/L)混悬液致炎。2.3　关节液白细胞计数及炎症因子、细胞因子的测定　收集关

5、节液,进行白细胞计数。IL-1β,IL-8含量检测按ELISA法试剂盒说明书进行;TNF-α,PGE2采用放射免疫测定法。2.4　关节及周围软组织病理学检查　取关节囊、滑膜组织,10%福尔马林溶液固定、梯度酒精脱水,常规石蜡包埋切片,HE染色,光镜观察关节囊及滑膜组织病变。2.5　统计方法　所测数据用(x±s)表示,统计学处理采用SPSS11.0统计软件包,组间比较采用t检验。3　结果3.1　对关节液白细胞计数及TNF-α和PGE2水平的影响　造模后,兔关节液中白细胞数量明显增加,提示出现急性炎症反应;与模型组比较,高、

6、中、低剂量组和秋水仙碱组兔关节液中白细胞数量明显减少(P<0.01)。见表1。表1　对关节炎关节液白细胞计数的影响(x±s,n=8)组别剂量(g/kg)白细胞计数(109/L）正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组阳性对照组--12630.00031.56±0.46★6.21±0.423.14±0.54★4.21±0.73★4.56±0.34★3.21±0.42★注:与模型组比较,▲P<0.05,★P<0.01造模后,模型组兔关节液中TNF-α和PGE2水平均明显增加;与模型组比较,秋水仙碱组和高,中剂量组TNF-α和PG

7、E2显著降低(P<0.05或P<0.01)。见表2。表2　对关节液中TNF-α和PGE2水平的影响(x±s,n=8)组别剂量(g/kg)TNF-α(μg/L)PGE2(μg/L)正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组阳性对照组--12630.000316.7±3.6★40.7±9.523.6±7.3★29.5±5.8▲36.2±7.621.3±8.3★9.3±3.4★27.6±5.814.3±6.2★18.3±4.2★25.4±6.315.2±6.1★注:与模型组比较,▲P<0.05,★P<0.013.2　对关节液中IL-

8、1β和IL-8水平的影响　造模后,模型组兔关节液中IL-1β和IL-8水平均明显升高;与模型组比较,高,中剂量组IL-1β和IL-8显著降低(P<0.05或P<0.01)。同时,秋水仙碱组IL-1β和IL-8均显著降低(P<0.01)。见表3。表3　对关节液中IL-1β和IL-8水平影响(x±s,n=8)组别剂量(g