NYT576-2002绵羊痘和山羊痘诊断技术.pdf

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1、11.220器1中华人民共和国农业行业标准NY/'r576-2002绵羊痘和山羊痘诊断技术Diagnostictechniquesforsheeppoxandgoatpox2002一08一27发布2002一12一01实施中华人民共和国农业部发布苏87NY/T576一2002前言绵羊痘和山羊痘(sheeppoxandgoatpox)是绵羊和1lI羊的病毒性疾病.是山绵羊痘病毒(sheeppoxonus)引起的一种接触性传染病，呈流行性，特征为发热、全身性丘疹或结节，有时也在勃膜上出现典型的痘疹，并有较高的死亡率。世界动物卫

2、生组织仁WorldOrganizationforAnimalHealth(英)、OfficeInternationaldesEpizooties(法),OTE]把该病列为A类疾病，我国农、Ib.部列为一类动物疫病。羊痘具有明显可见的特征性症状，通常采用活体检查，就可确诊.对十非典VY羊痘病例及血清学调查，可采用中和试验。本标准所规定的方法与ME推荐相应方法在技术I致。木标准的附录八、附录日为规范性附录本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标稚由全国动物检疫标准化技术委员会归日本标准起草单位:中国兽医药品监察所。本标准主要起草人

3、:江焕贤、王乐元。Nv/r576--2002绵羊痘和山羊痘诊断技术范围木标雕规定了绵羊痘和山羊痘诊断技术要求本标准所规定的临床检查适用于产地、市场、「1岸等羊痘的现场检疫。细胞中和试验适用于羊痘的检疫和流行病学调查。电镜检查、包涵体检查适用于羊痘的诊断和病原鉴定2临床检查2门临床特征绵羊痘和山羊痘的潜伏期一般为7d^14d感染初期表现为发热精神、食欲渐差。经2d-3d，当体温升至loc以上时，即先在体表无毛或少毛部皮肤及可视私膜上出现痘疹，随后在全身出现散在或密集的痘疹，进而形成痘肿，分典型痘肿和非典型痘肿典型(全经过型

4、)痘肿:初起时，痘肿呈圆型皮肤隆起，皮肤呈微红色，边缘整齐，进而发展为皮下湿润、水肿、水泡、化脓、结痴等系列反应。同时，痘肿的质地由软变硬;皮肤颜色也由微红色逐渐变为深红、紫红，严重的可成为“血痘”。患羊一般为全身发痘，并伴有全身性反应非典型(不全经过型)痘肿:痘肿在发生、发展，直至消退的全过程中.皮肤无明显红色，无严重水肿，以及出现水泡、化脓、结廊等系列反应，痘肿较小质地较硬及至有的成为“石痘”。患羊无严重的全身性反应有的病羊随着病程的发展，尚可见鼻炎、眼结膜炎、失明、浅表淋巴结肿大、喜卧不起、废食、呼吸困难、肺炎和继

5、发感染等症状。严重的体温急剧下降，随后死亡存活病羊，可在痘肿结痴后约1-2个月，因痴皮自然脱落、而在皮肤I留下痘痕(疤)。2.2病理变化病羊痘肿皮肤的主要病理变化，表现为一系列的炎性反应包括细胞役润、水肿、坏死和形成毛细血管血栓等。尸体剖检，通常可见不同程度的勃膜坏死、全身淋巴结肿大，呼吸和消化器官上有大小、多少不等的痘斑、结节或演疡。特别是在肺脏，尤为明显。在肝、肾表面，偶能见到自斑2.3判定根据2.1临床检杳结果可作出初步判定〕在皮肤或可视钻膜上有明显f散在或密集痘疹、痘肿或病理变化明显的判为病羊。精神、食欲、体态有

6、异常;皮肤或可视私膜L有疑似痘疹、痘痕(疤)的判为可疑羊。可疑羊应继续观察或做血清学试验以及电镜检查或包涵体检查〔、3中和试验3门细胞中和试验3}1}1材料准备3}1}1门细胞培养用营养液及溶液.配制方法见附录Ao3}1}1}2绵f-羔架丸细胞(S"r)制备方法见附录“。3.1.1.3绵1`痘和山羊痘抗原及相应标准血清3}1}1}4待检羊血清:以无菌手术白羊的颈静脉采血.并按常规方法分离血清经56('30min灭能后NY/T576--2002使用31.1.5待检T'.组织抗原:以尤菌手术剪取疑似痘肿皮肤或痴皮，用汉克(H

7、anks)液(见第A.1章)浸泡(含抗生素)30min,冲洗等处理后称量，用Hanks液制成1:10悬液，以1500r/min离心10min，吸卜清备用。3.1.2操作方法一(检血清抗体)3门.2门抗原稀释按瓶签注明装量，用Hank、液(见第八.1章)作1100稀释。3门.2.2加样每份被检血清取试管二支.各加血清。.5ml。然后，一管加人等量抗原稀释液(中和试验用);另一管则加入等量汉克(Hanks)液(血清毒性试验用)另取试管一支加汉克〔Hanks)液。5mL，然后加人等量抗原稀释液(抗原对照用)。31.2.3中和将

8、各试管混合物摇匀后置37C、水浴中和1h，期间每15min振摇一次门31.2.4接种取每管棍合物接种绵羊呆丸(ST)细胞单层两瓶。接种量为该细胞生长液的10%。接种时，倾去细胞生长液。接种后先置37C温箱吸附30min(期间轻轻摇动两次)，然后补足细胞维持液乳汉液(见第A.6章)，乳汉液内含3%-5%犊(胎)牛血清1