草果试验相关方法

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1、A.草果花部综合征与开花物候花粉在柱头萌发的荧光镜观察一．目的及意义在盛花期，选取开花后不同天数花朵，FAA固定。通过荧光镜观察，初步掌握荧光显微镜的使用方法及了解花粉在柱头上萌发的状况。二．原理和方法在草果柱头萌发的花粉，可用苯胺蓝试剂染色，造成与柱头或花柱组织染色上的分化而明显区别。荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高

2、，可对草果花粉的荧光现象进行观察和拍照。三．材料及药品材料：盛花期内，开花不同时期的花朵药品：FAA,6mol/LNaOH,蒸馏水，0.05%苯胺蓝（pH9-10磷酸缓冲液）21四．实验步棸1.采集在盛花期，选取开花后不同天数花朵，置于离心管内FAA固定，带回实验室（FAA的配制：福尔马林（38％甲醛）5ml＋冰乙酸5ml＋70％酒精90ml）。2.用6mol/LNaOH软化花朵柱头12h.3.蒸馏水水洗经软化后的材料。4.0.05%苯胺蓝浸泡软化后的材料5-6h（0.05%苯胺蓝染液的配制：苯胺蓝1g，溶于35％或95％酒精100ml）

3、。5.荧光镜下观察花粉是否萌发及其在柱头萌发的状况，可观察到明亮的黄绿色荧光现象，并拍照记录。五．注意事项：1.严格遵从实验步棸，注意各阶段处理时间。2.制片是注意一定要保持载玻片和盖玻片的清洁，要维持花粉组织原状，决不可将组织弄碎。3.片治好后应避光保存，而且要尽快观察，防止荧光的衰减。4.严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。5．进人暗室后接通高压稳压器电源，后再开启激发高压汞灯，当看到高压汞灯完全亮后，停止激发，再开始观察标本。216.要注意清洁目镜及物镜镜头，观察前玻片上不能有水。7.荧光显微镜的激发装置及高

4、压汞灯寿命有限，标本应集中检查，节省时间；汞灯应避免多次开启，关闭高压汞灯后半小时内绝对不能重新开启。8.每次使用后要正确关闭程序及切断电源，并在记录本上进行登记。实验材料及场地的选择：选择种植5或6年以上，生长发育正常的健壮植株，为便于作对照试验，可根据实验条件，实地考察后灵活选择沟边，阴坡，阳坡，及不同海拔的场地。OOU,OND两种草果类型的区别方法：于早上6:00上山，可看到一种草果开始散粉，到8:30左右已基本散尽；而另一种类型早上无变化，13:00开始散粉，16:30左右基本散尽。故，显而易见，前者为OOU（上午散粉型），后者为

5、OND（下午散粉型）。注：不同天气对开始散粉时间和持续时间有显著影响，阴雨天会有所延迟。开花物候和花期方法：21标记两种材料各30株，之后可观察记录总花期，花序花期，单花花期，并可用相机拍摄单花开花进程。在作总花期观察时，主要记录始花期、盛花期和末花期；对于花序花期观察，则观察记录草果花序开花天数，记录总天数（果实个数/总开花数=结实率）。每2d对总花数、开花数进行一次统计，并计算其开花百分比（开花数/总花数=开花百分比）；单花花期观察：单花开花天数、最先开花和最后开花的时间间隔等进行详细的记录。花的形态特征材料：花蕾期标记花期相近的健壮

6、植株的花序20个，花20朵，游标卡尺。方法：于花蕾期标记花期相近的健壮植株的花序20个，花20朵，每天观察一次花蕾，直至花朵开放。花开放当天，每隔2h观察一次。观察单花进程，测量柱头上举的角度及时间（此处操作极为困难，可不做）。21从早6-7点开始，到下午花谢为止。尤其注意早6-7点及下午3-4点区段，此量区段应连续观察。花朵开放之后，每天观察一次，记录花朵形状、颜色、柱头状态变化情况等。每个类型选取10株，每株摘取3朵开放的花进行观察、测量、记录花瓣和萼片的长度、颜色、大小，雄蕊和雌蕊各部分长度、颜色、形状等。摘取不同时期的花照相，对不

7、同时期的花序进行照相.B.草果繁育系统杂交指数的估算材料：草果植株10株，游标卡尺方法：按照Dafni(1992)的标准，在观测点选取个体10株，每株2朵花，进行花朵的直径及开花行为的测量评判。具体方法是：①花朵直径<1mm记为0，1～2mm记为1，2~6mm记为2，>6mm记为3。②花药开裂时间与柱头可授粉期之间的时间间隔同时或雌蕊先熟记为0，雄蕊先熟记为1。③柱头与花药的空间位置同一高度记为0，空间分离记为1。三者之和为OCI值。评判标准为：OCI=0时，繁育系统为闭花受精型；OCI=1时，繁育系统为专性自交型；OCI=2时，繁育系统

8、为兼性自交型，有一定一交可能；OCI=3时，繁育系统为兼性异交型，部分种需要传粉者；OCI=4时，繁育系统为异交型，部分自交亲和，多数种需要传粉者。花粉—胚珠比的估算材料及试剂：21草果花朵每