章病毒感染的检查方法和防治原则ppt课件

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1、第25章病毒感染的检查方法和防治原则ExaminationandStrategyofPreventionandTherapyforViralInfection第一节病毒感染的检查方法一、标本的采集和送检用于分离病毒或检测其核酸的标本，应采集急性期标本，要根据感染部位采集标本，应严格注意无菌操作。由于病毒在室温中很易被灭活，应在采集和运送标本中注意冷藏。Theprincipleforthecollectionofspecimenforviraldiagnosisissameasthatforbacteriainadditiontothefollowing.1.Addin

2、gantibioticsintothespecimen.2.Theviralspecimenstoredintothelowtemperatureorice-bagandtransportedtothelabASAP.Storedatthe-70oCorliquidnitrogeninlab.3.Thepathologicaltissuestoredinthe50%neutralglycerol4.Theserumtakenatonsetofillnessand2-3weeksafterrecovertocomparethetitreofantibodies.二、病毒

3、分离培养的方法1.动物animals接种：如鼠、兔、犬、牛和猴等。2.鸡胚chickenembryo接种：针对有些病毒，如流感病毒、痘病毒。3.细胞cellculture培养：有三种类型的细胞。IsolationandidentificationofvirusesinthelabisGoldstandardfordiagnosis.（1）细胞类型①原代细胞Primarycellculture：对多种病毒的易感性高，主要用于从标本中分离病毒。②传代细胞Continuouspassagecellline：是指可在体外连续传代的细胞。大多数来自肿瘤组织或二倍体细胞，如Hel

4、a细胞或自发转化的原代细胞系，如中国地鼠卵巢细胞（CHO）。这些细胞系的染色体与正常细胞不同，为多倍体。③二倍体细胞Diploidcellline：则为在体外连续传代50～100代后，仍保持其二倍染色体数目的细胞。（2）病毒增殖指标①细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）：溶细胞型病毒感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。未接种病毒的细胞CPE的细胞（Hela细胞，柯萨奇病毒感染）②血吸现象：感染细胞膜上带有病毒（正黏病毒，副黏病毒）血凝素与加入的红细胞结合。③干扰现象：当两种病毒感染

5、同一种细胞时，常发生一种病毒抑制另一种病毒复制增殖的现象。(三)病毒的鉴定病毒的形态学鉴定：电子显微镜、光学显微镜病毒血清学鉴定病毒成分鉴定（4）病毒定量方法空斑形成单位（plaqueformingunit,PFU）：测定病毒数量可用空斑形成单位。一个空斑是标本中一个病毒大量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制增殖使局部单层细胞脱落，此即空斑。50％组织细胞感染量（TCID50）红细胞凝集试验光镜、电镜分离培养免疫荧光ELISA分子生物学技术SouthernblotPCRNorthernblot病毒感染的检测方法三、病毒感染的血清学诊

6、断采用免疫标记技术，即用荧光素、同位素、生物素和酶等标记已知的特异性抗体，用于检测病毒感染局部脱落细胞或分泌物细胞中的抗原，来早期诊断病原。机体血清中出现抗某种病毒的抗体，除患过相应的疾病外，亦可因隐性感染或疫苗接种而产生。因此，抗体效价必须明显高于正常人群的水平或随病程递增才有诊断价值。用已知的病毒与血清中未知的抗体进行反应。Theknownantigenofvirususedforthedetectionofunknownantibodyintheserum.1.neutralizingtest:NTtest2.complementfixationtest,CFt

7、est:3.hemoagglutinationinhibitiontest:4.agarimmuno-diffusiontest:新病毒的鉴定identificationofnewlyviruses:1.typesofviralnucleicacid:DNaseandRNaseusedforconfirmofDNAorRNA.2.Detectionofphysic-chemicalproperties3.morphologicalobservation:4.serologicaldiagnosis5.genesequenceandmatch.第二节病