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《hoxa调控围着床期pcaf表达机制研究（可编辑）》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、南京师范大学博士学位论文HOXA10调控围着床期p/CAF表达机制的研究姓名:孙海翔申请学位级别:博士专业:细胞生物学指导教师:李朝军2009-05博士学位论文中文摘要中文摘要Hoxa10是同源框基因家族中的一员,是生物发育的重要调控基因,在胚胎期子宫发育和胚胎着床中发挥关键性作用。HOXA10通过调控一系列下游基因的转录,参与细胞的生长、增殖、分化、凋亡的调控。但是对其调节的胚胎种植相关下游靶基因知之甚少。染色质免疫沉淀技术chromatinimmunoprecipitationassay,ChIP是一种在体内研究DNA-蛋白质相互作用的理想方法,广泛应用于高通量筛选转录因子的未知基因
2、靶点和研究反式作用因子在整个基因组上的分布情况,有助于揭示DNA-蛋白质相互作用的调控网络。我们利用染色质免疫沉淀与分子克隆技术相结合的方法,鉴定出HOXA10的新靶基因为p/CAF。共激活因子p/CAF是表观遗传调节分子,这种分子在靶基因乙酰化激活转录和多种信号转导过程中扮演着重要的角色。通过定量RT-PCR和Westernblot等分子生物学方法,我们利用体内外实验检测了p/CAF表达,确认了HOXA10对其调控的关系,并对其他一些相关的功能进行了研究。我们的研究结果如下:1.通过ChIP及CHIP-PCR方法,首次发现并验证了p/CAF是HOXA10的新靶基因;2.HOXA10通过
3、结合p/CAF启动子中的顺式作用元件“TTAT”抑制p/CAF的表达,并发现在三个连续的TTAT位点之间的距离影响HOXA10的生物学效应;3.体内实验表明在胚胎着床窗口期p/CAF的表达与HOXA10呈相反趋势,并且子宫内过表达p/CAF可降低小鼠胚泡的着床率。本研究通过对HOXA10的靶基因p/CAF分子机制的系统研究,揭示了在围着床期HOXA10通过抑制p/CAF表达而调节胚胎的植入,这些发现将为阐明子宫内膜原因致不孕机制和胚胎种植调控研究开拓新的思路。关键词:Hoxa10,p/CAF,ChIP,种植1博士学位论文AbstractAbstractThehomoeoboxgeneHo
4、xisanimportanttranscriptionregulatoryfactorinembryonicdevelopment.Asamemberofhomoeoboxgenefamily,HOXA10playsakeyroleinembryonicuterusdevelopmentandembryoimplantation.Itcanregulateaseriesoftranscriptionofthedownstreamgenes,includingcytokine,transcriptionfactor,cellcycleregulatingfactor,apoptosisfa
5、ctor,protease,stressreactionfactor,etc.HOXA10contributessignificantlytocellgrowth,proliferation,differentiationbyregulatinguponitsdownstreamgenes.However,HOXA10targetedgeneswhichisrelativetoembryoimplantationarefewknownChromatinimmunoprecipitationassay,ChIP,isanidealmethodtostudytheDNA-proteinint
6、eractioninvivo.Itiswidelyusedinhigh-fluxscreeningtheunknowngenetargetsoftranscriptionfactors,aswellasininvestigatingthetrans-actingfactordistributiononthewholegenome,helpingrevealingthecontrolnetworkofDNA-proteininteraction.Atpresent,itwasconfirmedthatHoxa10isinvolvedinthetranscriptionofmanykinds
7、ofgenes.ByChIPandmolecularclonetechnology,wefoundanewtargetgeneofHOXA10,namedp/CAF.p/CAFisaco-activator,playinganimportant,inpart,inthebiologicaleffectofnuclearreceptorandvarioussignalpathways.ThroughquantitiveRT-PCRan
