默克密理博的amicon离心超滤

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1、默克密理博的Amicon离心超滤装置是一种理想的工具，可以用来对盐分、糖类、核酸、非水溶剂及其他一些低分子量物质进行去除和更换。他们还可以用来分离未结合上的游离标记物。密理博离心超滤装置具有快速、方便、回收率高的特点，可替代并优于透析及乙醇沉淀。AmiconUltra-4和AmiconUltra-15具有高速度高回收的特点。他们使用低吸附性的Ultracel再生纤维素超滤膜，可用于蛋白质、抗原、抗体、酶和微生物的浓缩纯化。其快速和高回收的特点非常适合于脱盐和缓冲液置换。AmiconUltra离心超滤装置经常用于对蛋

2、白质色谱纯化过程产生的色谱柱组分进行浓缩和脱盐。以下两个例子展示了AmiconUltra离心超滤装置对于蛋白质和活性酶回收的应用。方法1.选择具有合适NMWL和体积的离心超滤装置；2.把样品置于过滤装置的储液管中；3.如果样品体积小于过滤装置的最大体积，则可以把它稀释到最大体积后再离心，这有助于更有效地除去盐分；4.在特定的离心力下和推荐的时间进行离心；5.将滤过液从滤管中取出，放置一旁；6.加入水或缓冲液使样品体积达到4ml(AmiconUltra-4)或15ml(AmiconUltra-15);7.再次离心；8

3、.取出滤过液，放置一旁；9.回收浓缩的已脱盐样品。注意：请将两次的滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。结果：盐分通过滤膜的过程不依赖样品的浓度和体积，用超滤的方法来脱盐并不改变缓冲液的组成，比如说，含有500mM盐分的溶液在初次离心后它的盐浓度并不发生改变。再往超滤管中剩余溶液中加入水或无盐缓冲液，再次离心，则会降低溶液中的盐浓度。这个过程我们将它称为等体积超滤，反复多次地操作，可以使溶液盐分降到最低。如果我们想将样品用不同打分缓冲液溶解，则我们可以使用等体积超滤达到目的。样品浓缩后，然后加入目的缓冲液，再进行

4、反复得稀释和浓缩。如表3.1-3.4中所示，使用默克密理博的离心超滤装置，只需一次过滤，样品中90%以上的盐分都被去除。最后，只要再离心一次，可以使样品中高达99%的盐分都被去除，而且样品的回收率高达90%以上。用色谱法进行蛋白质纯化，经常得到许多的色谱组分，而其中只有一些组分中含有目标蛋白质。将这些组分合并后，我们就可能需要通过一步蛋白质浓缩过程将蛋白质储存起来，或者需要通过缓冲液置换将样品浓缩，以便下游的分离。经过细胞破碎、分段富集、去除部分杂质等一系列操作，样本的体积不断加大，蛋白质浓度下降，有时已经不适合后

5、继的蛋白质样本检测或者上样了。怎么办？这个时候不外3类选择：浓缩，沉淀，过柱。过柱既然是分离富集的常用方法，自然也有浓缩特定目标蛋白的效果，生物通前文已有介绍。效果最好的自然是专一吸附富集和洗脱的亲和柱，比如HisTag之类的。如果过柱后洗脱浓度还不够，也要继续用其他方法浓缩。亲和沉淀或者免疫沉淀原理也一样----比如琼脂糖偶联抗体做亲和沉淀----借助抗体吸附目标蛋白，借助琼脂糖重力离心沉淀，能有效的富集纯化目标蛋白，缩小体积，而且不影响目标蛋白活性。但是多数情况下，无处可觅亲和的“那一半”，又要继续后继实验，就

6、只好采用浓缩或者沉淀。浓缩由于沉淀可能导致或多或少的样本损失，不可逆沉淀等问题，原则上，能不用都尽量不用沉淀的方法。冷冻干燥相对能比较好的保持蛋白质活性，非常有效的缩小溶液体积和提高浓度，而且没有什么损耗和花费。问题是你首先得有冻干机，而且冻干不能去除样品溶液中的盐等其他杂质。超滤是浓缩样品的更好的选择。超滤是一种膜分离技术，它的特点是使用不对称多孔膜，根据分子的大小来分离溶液中的大分子物质与小分子物质，是一种温和的、非变性的物理分离方法，尤其适用于蛋白质等大分子溶液的浓缩，纯化以及缓冲体系交换等。超滤操作最简单的

7、工具莫过于离心超滤管----通过离心力，使溶液中的小分子溶液和溶剂透过超滤膜,被收集在滤过液收集瓶中，而大分子溶质则被超滤膜截流在样品浓缩管中。该方法的特点是操作简便，只需要高速离心机，无需其他特殊设备，速度快，可以相当地有效浓缩样本，而且可以部分去除样本溶液中的盐、去垢剂等可溶性小分子，有利于更换缓冲体系。操作：离心超滤管的使用非常简单，按照样品量和目标分子量选择适当的离心超滤管，加入待浓缩的样品溶液，按照超滤离心管指示离心速度和时间离心，最后回收滤管中截留的样品溶液。回收率：一般回收浓度大于0.1mg/ml的溶

8、质，回收率可达90%以上。通常样品损失是由于滤膜表面和容器表面的非特异性吸附引起的。选择口碑好、高品质的离心超滤管非常重要，因为高品质的离心超滤管选用低吸附材质，精细抛光，可最大限度地降低了吸附性。滤膜表面样品的吸附量与样品和滤膜材质有关，一般为2-10μg/cm2。如果研究的对象是滤过液，由于其滤过时要穿过滤膜的整个内部结构，所以吸附量相对较大，为20-1