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1、濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性濒危高原植物羌活化学成分与生态因子的相关性 我国气候生境的多样性,形成了特有的中药材多道地、多产地现象1。道地药材的生长要求特定的生长温度、湿度、降水等自然生态环境条件。研究适宜道地药材生长的生态环境是中药资源可持续发
2、展的重要命题0。中药资源生态学是中药资源与生态学相结合的一门新兴学科H,中药材品质与生态因子相关性研究是其重要组成部分?。课题组前期研究表明，相对湿度和年降水量是影响黄花蒿中青蒿素积累的主导因子S。温度在人参中的皂苷类成分的积累中起着决定性作用63。Jmg&]等认为土壤类型是影响枸杞多酣类含量的主要因素。ShutingYang等68发现玄参中玄参苷的积累与温度呈正相关性。 羌活为大宗药材品种。具有解表散寒、胜湿止痛的作用，为中、藏、羌医药体系中的常用药材,主要化学成分是羌活醇和异欧前胡素011。四川、青海、甘肃为羌活三大主产区M。羌活主要分布于高原寒冷阴湿地带，生长周期长M,加之市
3、场需求增长,野生资源已面临严重危机M。《中国珍惜濒危保护植物名录》已将羌活列为二级保护物种,并载入《中国物种红色名录》M。目前对羌活的研究集中在真伪鉴别及质量评价方面,对羌活产地的生态因子与其化学成分的关联尚无报道。本研究对四川、青海、甘肃羌活主产地羌活的羌活醇和异欧前胡素进行含量测定,应用中国气象科学数据共享服务平台（http：//cdc.cma.gov.cn/)获得了不同产地的生态因子值,应用偏最小二乘回归分析（PLS)、冗余分析（RDA)及主成分分析（PCA)方法探讨了羌活活性成分与产地及气候因子的关联性,研究结果为濒危物种羌活保护与利用、可持续发展及引种栽培提供参考。 1材料、仪器
4、与试剂1.1材料 栽培羌活、宽叶羌活两年生药材于2010年10月下旬采收自四川、甘肃、青海等省,栽培羌活54个样品，宽叶羌活11个样品共计65个样本（图1)。将药材粉碎,过3号筛,经HPLC测定其含量。原植物由中国医学科学院药用植物研究所黄林芳副教授鉴定为羌活（N.incisum)和宽叶羌活（N.franchetii)。 1.2仪器与试剂1.2.1仪器 Waters1525HPLC系统（Milford,MA,USA),WatersAF型在线脱气机，Waters1525HPLC型二元泵，Waters717型自动进样器,恒温柱箱以及Breeze色谱工作站。 1.2.2试剂 甲醇、乙腈（
5、Fisher,色谱纯）、磷酸（Sigma,色谱纯）、其余试剂为分析纯。 2方法 2.1羌活化学成分含量测定2.1.1对照品 异欧前胡素（批号：110827)购自中国药品生物制品检定所，羌活醇（批号:0773-9607)购自上海同田生物,纯度经高效液相色谱分析大于98%。 2.1.2对照品溶液制s,USA),柱温35C,流速1.0mL/min,样品进样体积10xL。流动相组成乙腈（A)和0.01%磷酸水（B)。检测波长310nm。色谱条件如下&1'15]：0-13min,13%-17%A；13-20min,17%A；20-22min,17%-44%A；22-31mi
6、n,44%-57%A；31-38min,57%A;38-45min,57%-100%A;45-50min,100%A。 2.1.5线性关系考察 分别精密吸取混合对照品储备液2、10、40、100、200、400、600xL至1mL量瓶中，加甲醇至刻度，按上述色谱条件进行HPLC分析，以各标准品的浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标（Y)进行线性回归,得到各线性回归的方程。最小检测限（LOD)和最小定量限（LOQ)定义为信噪比分别等于3(S/N=3)和10(S/N=10)时对应的含量（表1)。 2.1.6精密度试验 分别在1d和连续3d内吸取上述混合标准储备液400xL,稀释至1mL
7、,进样体积10xL,在所确定的HPLC条件下重复进样6次测定,记录各成分色谱峰面积,计算其质量分数。结果羌活醇、异欧前胡素在72h内的RSD为2.26%,1.71%。 2.1.7稳定性试验 取上述对照品溶液,分别在0、、4、8、12、24、36h,按上述测定方法进行测定,记录峰面积,各对照品色谱峰的峰面积对应的浓度的RSD值在1.06%和1.02%范围内，表明样品至少在36h内稳定。 2.1.8重现性试
