临床研究类医学优秀论文 (27)

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1、野生型PTEN基因重组腺病毒表达载体构建的改进及其鉴定作者：林观平，李树梅，熊亮，周克元作者单位：广东医学院生物化学与分子生物学教研室,广东湛江524023;四川省攀枝花市十九冶医院妇产科,四川攀枝花617023;赣南医学院预防医学教研室，江西赣州341000【摘要】目的为改进构建野生型抑癌基因PTEN重组腺病毒表达载体的方法。方法用抑癌基因PTEN与带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrackCMV重组后转化含腺病毒骨架载体pAdEasy1的E.coliBJ5183（Ad1cells），以获得重组腺病毒质粒，经限制酶PacⅠ线性化后，转染293细胞,检测

2、PTEN蛋白的表达，并以AdPTEN感染人乳腺癌MCF7细胞后,测其感染率。结果获得PTEN基因的重组腺病毒表达载体(AdPTEN)，受AdPTEN转染的293细胞发生肿胀或圆缩的形态改变，经PCR对传代的AdPTEN分析证实得到目的基因PTEN，荧光显微镜下能观察到293细胞内有绿色荧光。通过Westernblot可检测到293细胞中PTEN蛋白高效表达。AdPTEN感染的人乳腺癌MCF7细胞,感染率达80%～90%。结论PTEN重组腺病毒表达载体可在细菌体内进行同源重组而构建，方法较简便、快速，且生成的病毒滴度高、感染率高。【关键词】重组腺病毒

3、；PTEN；基因治疗基金项目：广东省重点学科建设资助项目(编号:GX9307)　　　ImprovementofconstructionofwildtypePTENgenerecombinantadenovirusexpressionvectoranditsidentification　　LINGuanping,LIShumei,XIONGLiang,ZHOUKeyuan　(DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology,GuangdongMedicalCollege,Zhanjiang524023,China)　　

4、Abstract:ObjectiveToimprovetheconstructionofadenovirusexpressionvectorharbouringwidetypetumorsuppressorgenePTEN.MethodsPTENgenewasinsertedintotheshuttlevectorpAdTrackCMVcontaininggreenfluorescenceprotein(GFP)gene,therecombinantplasmidcontainingadenovirusbackbonevectorpAdEasy1wasth

5、entransformedintoE.coli(BJ5183).PTENproteinexpressionintherecombinantwasdeterminedafterPacIlinearizationand293celltransfection,anditsinfectionratewasdetectedbyhumanbreastcancercelllineMCF7infection.ResultsRecombinantadenovirusexpressionvectorAdPTENwasobtained.Thetransfected293cells

6、showedcytopathiceffect.PTENgeneandproteinexpressionandgreenfluorescencewereobservedinpassage293cells.TheinfectionrateofMCF7cellswas80%～90%.ConclusionRecombinantadenovirusexpressionvectorAdPTENcanbeconstructedbyhomologousrecombinationwithbacteria.Theconstructionmethodissimpleandrapi

7、d,andAdPTENinfectiontestexhibitshighvirustiterandinfectionrate.　Keywords:recombinantadenovirus;PTEN;genetherapy　基因治疗的关键是基因载体的选择，近年来广泛使用的是腺病毒(adenovirus,Ad)载体。其主要优点在于能够在哺乳动物及其他多种细胞进行基因转移和蛋白的高效表达,且跟宿主细胞染色体不发生整合，是一种比较安全，转染效率又高的载体［1］。然而由于构建重组腺病毒载体的传统方法繁琐费时,对实验条件要求较高,并需要一定经验等因素而严重束缚了其应用。

8、因此,建立简单、快速的获