微生物综合实验设计方案(1)2new

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1、微生物综合实验设计方案第八小组（曹婉仪蔡楚萍贝锦涛张韵红）一、取样取三个经高压蒸汽灭菌的锥形瓶，于华师校园内湖中取水样。分别选取三个取样点（韵红：取样点需要再精确到确切地点吧，如：取样点1：…取样点2：…取样点3：…还有取样点选取的依据是不是也要交代），分别编号1.2.3，于水面以下10cm，取水各100mL，盖好瓶塞。器具：三角瓶*3个二、测水体pH值为了大致地确定水体微生物的生长适宜pH（个人感觉这说法有点奇怪，好像暗示测出来的pH就是适宜生长的pH似的，至少改为：为了了解华师湖水的pH吧，或者改为其他更好的说法），取好水样后，分别用pH计测量三个水样的值，每个水样各测量三

2、次，取平均值。将三个水样混合均匀，得到混合水样，用pH计测量pH三次，取平均值。器具：pH计三、分离提纯2种微生物1、材料：混合水样2、方法操作名称具体步骤试剂和材料器具（经高压蒸汽灭菌）配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL1、配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL，分装于两个三角瓶2、高压蒸汽灭菌（灭菌材料：250ml三角瓶*5，培养皿*？，试管*11，1ml移液管*5,10mll量筒*1）3、倒10个平板2支试管斜面（按原来写的也要13个平板，怎么会是10个，而且还没有设置对照的平板；如果要作×10000，还要更多平板。我觉得做15~20个平板比较好。斜面是不是做4个比较好啊

3、）NaCl2g蛋白胨4g牛肉膏1.2g400mL水1mol/LNaOH1mol/LHCI(pH7~7.6)高压蒸汽灭菌锅天平玻璃棒500ml大烧杯*1个250ml三角瓶*2个封口膜*2张绳子*2条培养皿*？套（数目有待确定，看倒多少个平板）试管*4个胶塞/棉塞*4个报纸多张稀释涂布分离细菌（微生物吧，这里还不是细菌）1、取0.2ml混合水样进行稀释，设置四个梯度：原液、×10、×100、×1000，分别装于4个试管中，标明稀释度，每种稀释度5ml（万一微生物太多，可能需要×10000，我觉得多做一个比较保险）2、涂布四个平板（八?需要每个稀释度做两个平板吗？万一污染怎么办？）3

4、、37℃恒温培养箱中倒置培养24h混合水样蒸馏水空白平板*4个（用于涂布分离，若做×10000，则为5个）恒温培养箱1ml移液管*5个10ml量筒试管*4个（若做×10000，则为5个）酒精灯酒精棉球涂布器标签纸平板划线分离细菌（不一定是细菌吧）1、选取稀释涂布平板操作中分离程度较好的两种微生物的（一种是细菌，另一种是要做什么微生物啊？）平板菌落（要说明是否要来自同一稀释度吧），进行平板划线，各划线2个平板2、37℃恒温培养箱中倒置培养24h（若另一种微生物不是细菌，可能就要改一下培养时间吧？）涂布分离的平板空白平板*4个恒温培养箱酒精灯酒精棉球接种环标签纸平板划线分离细菌（不

5、一定是细菌吧）1、两种微生物均选取划线操作效果好的菌落，进行第二次平板划线操作，各划线2个平板2、37℃恒温培养箱中倒置培养24h（若另一种微生物不是细菌，可能就要改一下培养时间吧？）第一次划线分离的不同菌种的平板*2个空白平板*4个恒温培养箱酒精灯酒精棉球接种环标签纸平板菌种接种到试管保藏1、用接种环把菌种接种到试管斜面，每个菌种接种2个斜面2、37℃恒温培养箱中培养24h（若另一种微生物不是细菌，可能就要改一下培养时间吧？）3、待菌种在固体斜面培养基上生长丰满后，注明菌类或菌种名、保藏日期、保藏人，然后置于4~8℃的冰箱中保存第二次划线分离的不同菌种的平板*2个空白斜面培养

6、基*4个恒温培养箱冰箱酒精灯酒精棉球接种环标签纸四、革兰氏染色细菌的革兰氏染色1、制片：涂片：滴1滴无菌水于载玻片，挑取少许菌体与水滴均匀混合；干燥：火焰上方略加温；固定：用加热法，通过火焰3次2、染色：结晶紫初染1min，水洗；碘液媒染1min，水洗；95%乙醇脱色20~30s，水洗；番红复染1min，水洗3、镜检材料：第二次划线分离的不同菌种的平板*2个试剂：无菌水、结晶紫、碘液、95%乙醇、番红器具：载玻片、接种环、酒精灯五、观察细菌的形态特征在高倍镜和油镜下观察细菌形态，拍下照片，画图，描述形态特征器具：显微镜六、生理生化试验（淀粉水解、糖酵解）（1）淀粉水解实验以无菌

7、操作技术，把两个菌种接种到同一个平板上，划成“+”字形，平板的一边接一个种在平皿底部做好记号，盖上盖，37℃恒温培养箱中倒置培养24h平皿盖打开，滴加卢卡氏碘液于接种处记录结果：有水解圈：淀粉水解实验阳性，用+表示；无水解圈：淀粉水解实验阴性，用-表示(2)糖酵解实验配置葡萄糖发酵培养基50ml,分装5支试管中，高压蒸汽灭菌取葡萄糖发酵培养基试管3支，分别接入两种菌种，用标签纸标明菌类或菌名、发酵培养基名称，第3支不接种，作为对照。接种后，轻摇试管，使混合均匀37℃恒温培养箱中静止培养24h