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1、总黄酮测定方法仪器与设备：1.恒温混匀仪BG-200(杭州朗基科学仪器有限公司)2.移液枪(p1000,p200)3.分析天平（SHIMADZUPHILIPPINESMANUFACTURINGINC.AUY220日本岛津）4.15×150mm玻璃试管5.具塞玻璃试管,10mL6.容量瓶,1000,100,10mL7.紫外-可见分光光度计（UV-1800日本岛津）试剂：1.硼氢化钠(成都市科隆化工试剂厂,NaBH4,FW37.83,粉末,分析纯,≥97.0%)避光干燥保存。2.三氯化铝(天津博迪化工股份有限公司，AlCl3·6H2O,FW165,分析纯，晶体,≥99.0%)3.四氯苯醌(FW
2、245.88,AladdinIndustrialCorporation中国上海，FW245.88≥98%,分析纯)4.乙醇(EtOH)(成都市科隆化工试剂厂，FW46.07，无水乙醇,≥99.7%,分析纯)5.四氢呋喃(THF)(广东广华科技股份有限公司，FW72.11，≥99.0%,分析纯)6.冰乙酸(成都市科隆化工试剂厂,FW60.05,99.8%,分析纯)7.盐酸(成都市科隆化工试剂厂,36.0%-37%w/v,12M,分析纯)8.槲皮素(国药集团化学试剂有限公司，FW302.24,≥98%,生化试剂BR)9.香兰素(天津博迪化工股份有限公司,FW152.15,≥99.0%,分析纯)
3、试剂配制：1.0.3,0.5,1.0,2.0,4.0,5.0,6.0,8.0,10.0mM槲皮素溶液，溶剂为四氢呋喃：乙醇（THF:EtOH）=1:1。配制10mM槲皮素标准溶液：准确称取151.12mg槲皮素，用上述溶剂定溶至50mL容量瓶。2.50.0mMNaBH4乙醇溶液：称取189.2mgNaBH4,无水乙醇溶解，定容100mL容量瓶。(不宜长期保存;松开盖子以防炸裂)3.74.6mMAlCl36H2O乙醇溶液(含有1%H2O)称取1.80gAlCl36H2O,1mL水溶解，加入适量无水乙醇，后定容100mL容量瓶(储存防潮)。4.20.0mM四氯苯醌四氢呋喃溶液称取491.8mg
4、四氯苯醌,四氢呋喃（THF）溶解定容100mL.5.0.8M冰乙酸溶液称取4.84g冰乙酸,蒸馏水定容100mL.6.16%(w/v,1052mM)香兰素甲醇溶液称取16.0g香兰素,甲醇定容100mL.操作步骤：1.用移液管准确移取0.3、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0mL配置好的10Mm槲皮素标液于10mL容量瓶，用THF/EtOH(1:1,v/v)溶液定容。用移液枪移取槲皮素各浓度梯度标液1mL或者花椒叶各相浸膏稀释样液（5mg/mL）1mL于玻璃试管中（样液必须现配先用），空白采用THF/EtOH(1:1,v/v)溶液1mL。2.含有1mL样液或者
5、1mL槲皮素标液的试管中,加0.5mL50.0mMNaBH4溶液，0.5mL74.6mMAlCl3溶液,后在室温下于红外转子摇床内摇30min.再加0.5mL50.0mMNaBH4溶液，摇30min。3.加2.0mL冰的(4ºC)0.8M冰乙酸溶。避光，试管内溶液晃匀后，摇晃15min。4.加入1mL20.0mM四氯乙醌，后于红外转子摇床内，95ºC反应60min。5.反应完全后，自来水冷却。6.甲醇转出，至少两次，定容具塞试管于4mL刻度线处。7.加入1mL16%香兰素甲醇溶液，2mL12MHCl浓盐酸，混匀后室温(20-25ºC)下避光保存15min。8.于490nm下测定吸光度值，每
6、个样液重复三次。9.数据处理。总黄酮含量表示为:mmol槲皮素/g样品或者浸膏。数据为三组重复的mean±SD。数据处理：1.标准曲线：黄酮测定标曲制作原始数据：槲皮素标准液浓度mMAbs1Abs200.1670.1690.30.2570.2520.50.320.29210.3910.38820.5520.55540.880.89251.0041.12261.2681.26681.61.597101.9561.959黄酮测定标曲制作原始数据的系统性描述槲皮素浓度mMMeanStd.DeviationStd.Error95%置信区间MinimumMaximumLowerBoundUpperB
7、ound00.1680.00200.00120.1630.1730.1660.170.30.2550.00350.00250.2230.2860.2520.2570.50.3060.01980.01400.1280.4840.2920.3210.3900.00210.00150.3700.4090.3880.39120.5540.00210.00150.5340.5730.5520.55540.8860.00850.00
