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1、本科生毕业论文题目基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选学院轻纺与食品学院 专业轻工生物技术学生姓名程双 学号1043095006年级2010级指导教师吴重德二Ο一四年六月四日四川大学本科毕业论文基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选专业：轻工生物技术学生：程双指导老师：吴重德摘要角蛋白酶以其特异性分解角蛋白的特性，在废弃羽毛的处理，清洁制革技术等领域中得到广泛应用。本论文以实验室保存的地衣芽孢杆菌(BacilluslicheniformisX-47)作为亲本菌株，利用基因组重排技术，筛选高产角蛋白酶的菌株。对基因组重组的条
2、件进行了优化，得到BacilluslicheniformisX-4的最佳基因组重排条件为：菌龄8h，溶菌酶酶浓度1.0mg/mL，酶解时间30min，酶解温度40℃，融合时间15min，融合温度35℃，融合pH9.0，融合PEG浓度400g/mL。通过筛选得到第一代融合子Y1-28和Y1-31，Y1-28角蛋白酶活力为240.9±7.2U/mL，Y1-31角蛋白酶活力为257.5±17.5U/mL，较原始菌株分别提高了68.4%和80.0%。以Y1-28和Y1-31为亲本，筛选的第二代融合子Y2-33角蛋白酶活力为318.2±31.2U/mL，与较原始菌株相比提高了122.
3、4%。关键词：基因组重排技术角蛋白酶地衣芽孢杆菌i四川大学本科毕业论文基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选Screeningofhighkeratinase-producingstrainsbygenomeshufflingMajor:BiotechnologyforLightIndustryStudent:ChengShuangSupervisor:WuChongdeAbstractKeratinase,specializedindegradationofkeratin,isusedextensivelyinthetreatmentofwastefeatherand
4、thetechnologyofcleanproductioninleatherindustry.Thismanuscriptaimedtoscreenhighkeratinase-producingstrainthroughgenomeshufflingbyusingBacilluslicheniformisX-47asparentalstrain.Theconditionsforgenomeshufflingwereoptimized.theoptimalcellagewas9h,andtheoptimallysozymeconcentration,enzymaticti
5、me,andtemperaturewere1.0mg/mL,30min,and40℃,respectively.Thefusiontime,fusiontemperature,pH,andPEFconcentrationwere15min,35℃,pH9.0and400g/mL,respectively.Undertheoptimalconditions,thefirstgenerationoffusantsY1-28andY1-31werescreened,andthekeratinaseactivitieswere240.9±7.2U/mLand257.5±17.5U/
6、mL,whichincreased68.4%,and80.0%,respectively,comparedtotheparentalstrain.ThesecondgenerationoffusantY2-33wasisolatedbyusingY1-28andY1-31aspartentalstrains.TheactivityofY2-33was318.2±31.2U/mlwhichincreased122.4%comparedwiththeoriginalstrain.Keywords：GenomeshufflingKeratinaseBacilluslichenif
7、ormisi四川大学本科毕业论文基于基因组重排技术的角蛋白酶高产菌株的筛选目录第一章前言11.1角蛋白酶概述11.1.1角蛋白及其利用11.1.2角蛋白酶的研究11.2基因重排技术（Genomeshuffling）21.2.1基因组重排技术原理21.2.2基因组重排技术方法21.2.3基因组重排技术的优点31.3本论文研究的目的意义、思路设计及主要内容41.3.1研究目的意义41.3.2论文设计思路41.3.3主要内容5第二章材料与方法62.1实验材料62.1.1菌种62.1.2药品与试剂62.1.3培养基72.1
