酵母细胞分批培养 实验

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1、酵母菌分批发酵试验一、实验目的1.    学习酵母菌的发酵方法及其发酵过程的优化控制技术；2.    学习和掌握分批发酵一般过程和操作规程。二、实验原理　　酿酒酵母是一种食品级的微生物，人类从几千年前就开始利用它了，像夏禹时期就有仪狄作酒的记载。干酵母蛋白质含量高达45%，且其蛋白氨基酸品种齐全，维生素丰富，营养价值较高，是饲料工业、医药工业、发酵工业和食品工业的重要原料。早在1900年时，面包酵母已经形成大生产的规模。作为人类食物的酵母生产，则是在第一次世界大战时在德国发展起来的。酵母单细胞蛋白一直是

2、欧美市场上缺乏的蛋白质资源，国内也很匮乏。本实验在发酵工程课堂教学理论基础上，以分批发酵法制备酿酒酵母细胞为实践内容，深入理解发酵原理、方法以及过程及其优化控制方法。通过实践与理论的结合，加深对发酵工程的认识，进一步增进专业能力和素养。发酵工程实验日程表序号实验项目时间实验内容安排1培养基制备与灭菌预计4学时1、  固体培养基配制500ml/组，分装2瓶；2、  培养皿清洗及包扎15副/组；无菌水100ml/瓶；3、  吸管包扎4支/组；4、  液体培养基制备：800ml/组，分装16瓶，灭菌0.1MP

3、a,20min.2酵母菌种活化与种子制预计2学时1、菌种的分离纯化:超净工作台消毒（UV照射20min）→75%乙醇擦拭台面；活性酵母菌粉→无菌水溶解(稀释10-2倍)→涡旋震荡5min；倒平板(10副平皿/组)→平板划线分离→30℃倒置培养。2、接种准备工作：超净工作台消毒（UV照射20min）→75%乙醇擦拭台面。1、  种子培养接种：平板单一菌落→种子培养基（2环/瓶）→涡旋震荡3-5min；2、  摇瓶培养：摇床设置及调节（30℃，200r/m）→摇瓶固定→启动培养。3发酵罐结构、操作规程及酵母

4、菌分批发酵预计8学时1、  发酵培养基配制：18L。2、  发酵罐操作培训：发酵罐初始状态检查及调节→清洗（清水冲洗2-3遍）→发酵罐运行启动→发酵罐运行参数设置→空罐灭菌（0.15MPa,20min）→进料→实罐灭菌（0.1MPa维持30min）→冷却→火焰封口接种→发酵参数稳定状态调节与维持。3、  发酵取样：取样管灭菌→取样→再灭菌；4、  发酵中间过程分析（0hour）：pH测定（pH计or精密试纸）；酸度（中和法）；残糖测定（折光法）；菌体浓度测定（A600光密度法）5、  中间取样：每间隔4

5、h,取样管灭菌→取样→再灭菌.共计4-6次；4酵母菌的形态观察；酵母细胞的分离提取预计6学时1、  水浸片制作及观察2、  酵母菌分离条件试验3、  发酵结束工作：器皿、设备还原，环境清洁 实验一培养基制备与灭菌1、实验原理培养基是提供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的按一定比例配制的多种营养物质的混合物。一个完整的培养基配方组成包括组成成分、各组成成分的浓度和合适的pH。培养基的组成成分主要有碳源、氮源、无机盐和微量元素、水、生长因子以及特殊用途的前体和诱导物。实验利用葡萄糖、蛋白胨、酵母抽

6、提物组成的培养基分批发酵培养酵母菌。　　灭菌是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中将其除去。绝大多数工业发酵是需氧的纯种发酵，因此所使用的培养基须彻底灭菌。本实验采用121℃，30min的湿热灭菌法来对培养基进行灭菌处理。2、仪器、材料和试剂（1）仪器电子天平；高压灭菌锅（2）材料蛋白胨；酵母抽提物；葡萄糖；去离子水；pH试纸；NaOH；HCl；100mL三角瓶；250mL三角瓶；瓶塞；玻璃棒；称量纸；100mL量筒；500mL烧杯；培养皿（3）试剂　　固体平板培养基：葡萄糖2%，蛋白

7、胨2%，酵母抽提物1%，琼脂2%。　　液体培养基：葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母抽提物1%3、实验步骤（1）计算　按固体培养基和液体培养基的配方，计算500mL固体培养基和800mL液体培养基各物质的用量。（2）称药品　用砝码天平准确称量各物质。（3）溶解　将培养基的组分放加在500mL烧杯的水中，玻璃棒搅拌溶解。（固体培养基琼脂在室温下不能溶解，需加热煮化）。（4）分装　液体培养基每组按50L培养基/250mL三角瓶规格分装16瓶；固体培养基分装250mL培养基/250mL三角瓶。（5）包扎三角瓶口塞上

8、瓶塞后用牛皮纸和线绳包扎，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。在纸上写上培养基名称、组别、日期。（6）灭菌　放置于高压蒸汽灭菌锅内，121℃湿热灭菌30min。（7）倒平板　待高压蒸汽灭菌锅降温至60℃时，取出培养基，液体培养基室温放置，固体培养基在已紫外灭菌的超净工作台里倒制5-10只平板。【实验注意事项】（1）         准确称量各物质，称完药品应及时盖紧瓶盖。（2）         调pH值时要小心操作，避免回调。（3）