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时间:2018-07-18
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1、细胞生物学实验论文外来化合物对细胞生理代谢的影响—急性ZnCl2染毒对小麦幼苗茎叶组织SOD活力的影响指导教师:张小民李翠兰学院:生命科学专业:生物科学姓名:王兴通学号:2011312029摘要:本实验以急性ZnCl2和小麦幼苗为实验材料,研究了不同浓度(ZnCl2的浓度分别是100mg/mL、200mg/mL、400mg/mL、800mg/mL、1600mg/mL)对小麦幼苗生理活性的影响,初步阐明了Zn+2对小麦幼苗的毒害机理。结果表明,结果以浓度400mg/mL处理最佳,能够显著促进小麦根系的生长,根长、根重和根系活力分别比对照显著提高。在Zn+2胁迫下,随处理浓度的升高,小麦幼苗叶
2、片中超氧化物歧化酶(SOD)活性呈上下波动的趋势。通过对各组SOD值的分析可知,浓度小于100mg/L的Zn+2促进SOD同工酶的表达,浓度大于800mg/L的Zn+2抑制SOD同工酶的表达,中间浓度呈波动性影响,低浓度的ZnCl2可诱导小麦幼苗SOD的表达,而高浓度的ZnCl2会抑制SOD的活性。关键词:外来化合物;ZnCl2;小麦幼苗组织;SOD酶活性1.材料与方法1.1实验材料1.1.1材料:小麦幼苗:实验室固体培养基中培养1.1.2试剂:0.05mol/lPBS缓冲液(PH7.0)SOD试剂盒冰醋酸5个不同浓度ZnCl2溶液(100mg/l200mg/l400mg/l800mg/l
3、1600mg/l)1.1.3器材:离心机分光光度计天平恒温水浴锅冰浴微量移液器(100ul50ul)研钵离心管一次性塑料管1.2实验方法1.2.1ZnCl2染毒处理实验及粗酶提取液的制备浸种5-6h,萌发24-36h后将露白的种子随机摆放于培养皿中,30-40粒/皿左右,生长7天后,分别用不同浓度的ZnCl2溶液处理9天后,取茎叶0.2-0.3g,按1:20加入遇冷的PBS液(1/3用于研磨,2/3用于清洗,小范围研磨,便于冲洗),冰浴研磨,倒入离心管,并用剩余的PBS液冲洗入离心管。8000rpm离心15min,上清液即为5%的粗酶提取液,用于SOD酶活性的测定。1.2.2总SOD酶活力
4、测定(按下表进行)试剂测定管(4个)对照管(1个)SOD试剂11ml1ml粗酶提取液40ul--蒸馏水--40ulSOD试剂20.1ml0.1mlSOD试剂30.1ml0.1mlSOD试剂40.1ml0.1ml充分摇匀,置37℃水浴40min显色剂2ml2ml混匀,室温放置10min,于波长550nm处,1cm光径比色杯,蒸馏水调零,比色,测定各管OD值。2.结果与分析注:1%的粗酶提取液稀释倍数为100倍/g2.1不同浓度Zncl2溶液处理小麦茎叶总SOD酶活性Zncl2浓度(mg/L)各重复的总SOD酶活力总SOD平均值±标准差12340(对照)19382250214122162136
5、.2500±139.7912120021102442190619142093.0000±251.0644040030883094264332283013.2500±255.1540480021093133263128772687.5000±436.74363160019662254261925582349.2500±301.27216由表可知,当Zncl2浓度为200mg/L时,与对照组相比,SOD酶的活性增加,当Zncl2浓度为400mg/L,800mg/L和1600mg/L时,与对照组相比,SOD酶的活性减小。2.2不同浓度Zncl2溶液处理组之间SOD酶活的t-检验P值P0mg/L2
6、00mg/L400mg/L800mg/L2001.000———4000.007**0.005**——8000.1780.1171.000—16001.0001.0000.0591.000说明:当P>0.05时,差异不显著,P<0.05时,差异显著,用“*”表示。P<0.01时,差异极显著,用“**”表示。由表可知:Zncl2浓度为200mg/L与Zncl2浓度400mg/L相比,SOD酶活的差异极显著,说明该浓度对小麦幼苗SOD酶活的影响差异极大。Zncl2浓度为200mg/L与Zncl2浓度800mg/L相比时,SOD酶活的差异不显著,说明该浓度对小麦幼苗SOD酶活的影响不明显。Zncl
7、2浓度为200mg/L与Zncl2浓度1600mg/L相比,SOD酶活的差异显著,说明该浓度对小麦幼苗SOD酶活的影响较明显。Zncl2浓度为400mg/L与Zncl2浓度800mg/L相比,SOD酶活差异不显著,说明该浓度对小麦幼苗SOD酶活的影响不明显。Zncl2浓度为400mg/L与Zncl2浓度1600mg/L相比,SOD酶活差异不显著,说明该浓度对小麦幼苗SOD酶活的影响不明显。Zncl2浓度为800mg/L与
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