科技文献检索论文

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1、鸡球虫分子检测及遗传变异的研究进展摘要：鸡球虫病是由艾美耳球虫所引起的一种呈世界性分布的寄生原虫病，给世界养禽业造成巨大的经济损失。传统的病原检测方法费时且不够稳定。近年来，新的分子技术不仅为鸡球虫痛的诊断提供了快速、灵敏、特异、稳定的检测方法，而且以其为基础可用来建立可靠的种、株鉴定及耐药株与敏感株问差异分析的方法，为球虫群体生物学、流行病学、疫苗研究及遗传变异和耐药机制的相关研究等提供了重要手段。本文对鸡球虫分子检测技术和遗传变异方面的最新研究进展作一概述。关键词：鸡；球虫；分子检测；遗传变异鸡球虫病是由艾美耳属球虫感染所引起的、危害十分严重的

2、寄生虫病[1]，目前世界上公认感染鸡的艾美耳球虫有7个种。自然感染时常表现为两种以上球虫混合感染，常规的鉴别诊断主要根据卵囊形态、致病性、寄生部位、肠道病变等特征作为诊断指标，但由于球虫受到遗传和环境等多因素的影响，这些诊断指标有时会发生变异，因而难以作为鉴别诊断的可靠依据[2]。而以核酸扩增为基础的新型检测方法从病原基因组DNA入手，使得鸡球虫病原诊断由传统检测进入了以DNA为材料的现代分子检测时代。同时，利用分子技术对球虫的遗传学研究能更好地反映种、株的遗传变异关系，发现早熟株、耐药株和强毒株之间的遗传差异。本文对鸡球虫分子检测技术和遗传变异方

3、面的研究进展作一概述。1鸡球虫病的分子检测技术1．1多重PCR多重PCR是在同一反应体系中加入多对引物，同时扩增出多个核酸片段的PCK反应，可用于多种病原微生物的检测、鉴别和多态性分析。Fernan等[3]建立了一种依据7种鸡球虫的SCAR(sequencechracterizedamplifiledregion)标记设计种特异性引物来扩增特异性条带的多重PCK方法。结果显示该方法的最小检测浓度为1~5pg，样品中所有种类都可被同时扩增而不发生交叉干扰，具有高度的重复性，是鉴别诊断7种鸡艾美耳球虫的好方法。郭远忠等[4]将Fernandez报道的鸡

4、艾美耳球虫种特异性引物用于检测几种艾美耳球虫的相互污染情况，证实特异PCR对鉴定球虫的混合感染具有实用价值。辛玲等[5]根据巨型、柔嫩和堆型艾美耳球虫的ITs一1序列设计3对引物，建立了这3种球虫的多重PCR5检测方法，证实该法具有很强的特异性和较高的敏感性，可用于这3种鸡球虫的诊断和田间种类调查。多重PCR技术可满足同时分析不同DNA序列的需要，节约试验样品和试剂，操作省时省力。但其扩增条件严格，需优化反应条件，技术难度较大。1．2荧光PCR荧光PCR是荧光标记技术与PCR相结合的产物。Gasser等[3]立了一种用荧光标记的种特异性引物来扩增I

5、TS一2rDNA片段的方法来检测7种ez鸡球虫，结果表明用代表艾美耳特异性片段的DNAence样品作对照，图谱上的区域可以被用来做7个种的特异性诊断。随后，Gasser[3]阻1用被荧光标记的寡聚异性引核苷酸引物对7种鸡球虫的ITS-2序列进行扩增，研究结果表明可用图谱特异的条带来确定鸡球虫的种、株差异。该方法适合卵囊样品大批量的诊断性筛选，也将是流行病学研究、球虫病检测和疫苗质量控制的有效工具。1．3随机扩增多态性DNA(RAPD)陈兆国等[6]20个随机引物中筛选出7个引物，以随机引物成对组合的方式，对和缓、巨型和柔嫩艾美耳球虫3个种各2个单卵

6、囊感染纯株以及柔嫩艾美耳球虫6个抗药性表型不同的单卵囊感染纯株进行RAPD分析。几乎每个引物组均有种特异性条带出现，完全可以把3个种区分开来。而且通过对柔嫩艾美耳球虫抗药虫株和敏感虫株的指纹图谱分析，发现球虫不同表型株间可以通过RAPD方法鉴别，验证了有助于鉴别与抗药性有关的独特标记的猜想。因此，RAPD为鸡球虫种株鉴定、抗药性相关基因的寻找提供了一个有效手段，从而证明了RAPD技术在球虫的分类鉴定上的可行性。Fernandez等[7]从150个引物中筛选出了11个能够区分7种鸡球虫的RAPD引物，建立了一种把25个特异性的RAPD条带转换为SCA

7、R标记的方法，最终获得14个能够用于7种鸡球虫分子诊断的种特异性SCAR标记。这些标记已成为鸡球虫分子诊断及遗传差异研究的有用标记。1．4PCR连接的限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)Fernandez对来自澳大利亚的6种21样品的ITS一2rDNA进行扩增，其扩增产物的琼脂糖电泳结果显示异种球虫间扩增的条带数目和大小不同，但在同种不同株间差异不明显。扩增产物经纯化、酶切、放射性标记和变性后，进行变性凝胶电泳，发现PCR—RFLP图谱具有种特异性，认为球虫ITS-2rDNA区域含有能鉴别不同虫种的遗传标记。51．5扩增片段长度多态性(AFLP

8、)利用AFLP技术得到柔虫的遗传连锁图谱，从中筛选出379条多态性DNA标记。这个图谱的构建为球虫分类的研究提供了有用的框