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《转天山雪莲冷调节蛋白基因sicor烟草的抗寒性鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、转天山雪莲冷调节蛋白基因siCOR烟草的抗寒性鉴定郭新勇，程晨，王重，王恒良，喻娜，祝建波收稿日期：修改稿收到日期：基金项目：国家自然科学基金（NO.30960034）、国家自然科学基金（NO.31160049）和国家转基因专项(NO.2011ZX08005-004)。作者简介：郭新勇（1986-），男（汉），在读硕士研究生。E-mail:guoxinyong331@163.com*通讯作者：祝建波，副教授，主要从事植物基因工程研究。E-mail:zjbshz@163.com（石河子大学生命科学学院，石河子大学农业生物技术重点实验室，石河子832003）摘要：从已建立的天山雪莲cDNA文库
2、中随机挑取单克隆，采用通用引物M13进行PCR扩增出基因序列并测序，然后将该序列在GenBank中进行比对，根据该序列设计特异性引物进行PCR，最终获得了冷调节蛋白基因siCOR的完整开放读码框（ORF）。进一步构建出植物表达载体，通过农杆菌介导法获得转基因烟草，并利用PCR和RT-PCR对转化烟草进行鉴定，收取种子后筛选出纯合的T3株系，最后通过冷冻胁迫进行抗寒性分析。结果表明，siCOR大小661bp，与禾本科植物粳稻（OryzasativaJaponicaGroup）的冷调节蛋白基因相似性最高，为65.04%；与野生型植株相比，转siCOR基因烟草均长有浓绿的叶片，无分支侧芽，生长快
3、；在冷冻胁迫条件下，转siCOR基因的烟草叶片相对含水量、PSⅡ相对量子产率降低幅度、相对电导率和丙二醛含量的升高幅度均低于野生型烟草植株，而且转siCOR基因烟草植株叶片出现萎蔫症状的时间较迟、程度较轻，受到的伤害也较轻。可见，在冷冻胁迫条件下，转siCOR基因烟草植株表现出良好的生理和生长优势，显示出了较强的抗寒特征。关键词：天山雪莲；siCOR基因；烟草；抗寒性中图分类号：Q789文献标识码：AColdResistanceIdentificationofTobaccoPlantsTransformedbysiCORofSasussuredinvolucrataKar.etKirGUO
4、Xin-yongChengChenYUNaZHUJian-bo(LaboratoryofAgriculturalBiotechnology,CollegeoflifescienceofShiheziUniversity,ShiheziXinjiang,832003,China）Abstract：SeekingmonoclonalinestablishedcDNAlibraryrandomlyforPCRdirectedwithuniversalM13primerandsequencing,comparingthesequenceinGenBank,designingspecificprim
5、eraccordingtothesequence,finallyweobtainedthewholeORFofsiCOR.ThenplantexpressionvectorpBIN438-siCORwasconstructedandNC89tobaccoplantsweretransformedviaAgrobacteriumtumefaciens,PCRandRT-PCRanalysisindicatedthatsiCORhadbeenintegratedintothegenome.Homozygoustransgenictobaccoplantswereusedincoldresist
6、anceidentification.Theresultsshowthat,thesizeofsiCORcDNAwas661bp,theidentityofaminoacidsequencewasabout65.04%withOryzasativaJaponicaGroup.siCORtobaccohasdeepgreenleaves,growsfastandhasnolateralbudcomparedwithwildtype;underthecoldstress,thedecreaseofrelativewatercontent,reductionofrelativequantumyi
7、eldofPSⅡ,increaseofrelativeconductivityandMDAofsiCORtobaccoarelesserthancontroltobaccoevidently,besides,transgenicplantshasslowphenotypeandlightersymptom.Accordingtotheabove,wecandrawthat,underthecoldstress,siCOR
