茜草色素光泽汀与dna相互作用机理的研究

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1、茜草色素光泽汀与DNA相互作用机理的研究现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2014,Vol.30,No.12高颜，李军生，王倩倩，李蔚仑，黄国霞，闫柳娟（广西科技大学生物与化学工程学院，广西柳州545006）摘要：在pH7.41的生理条件下，以溴化乙锭（EB）作为光谱探针，采用紫外可见光谱和荧光光谱等方法对茜草色素光泽汀（Luc）与DNA的相互作用机理做了初步探讨。同时还研究了光泽汀对DNA分子的热变性以及粘度影响。在碘化钾（KI）效应实验中，以收稿日期：2014-05-27基金项目：广西自然科学基金(2010GXNSFAO13134)作者简介：高颜（

2、1990-），女，硕士，研究方向：分子生物学通讯作者：李军生（1963-），男，博士，教授，研究方向：分子生物学道指出蒽醌类物质的遗传诱变性依赖于其具有的特定结构[6]。光泽汀是具有平面刚性结构的蒽醌类物质，它的大小与DNA碱基对之间的距离相近，很容易嵌入到其中。由于食用色素可能成为人体长期并大量摄43现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2014,Vol.30,No.12—————————————————————————————————————————————————————入的物质，研究其潜在毒性对人们的生命安全具有重要的意义。而探讨小分子物质与DNA

3、的相互作用机理通常需要借助某些有机染料作为荧光探针[7]。二苯胺蓝、溴化乙锭、中性红和耐尔蓝等有机染料是探讨小分子物质与DNA结合方式时常用的荧光探针。本实验选用溴化乙锭作为荧光探针，在pH7.41条件下探究光泽汀与DNA的相互作用机理。如图1所示，由于光泽汀的平面刚性结构，从而具备独特的荧光性质和电化学性质，因此本文选择光谱法和循环伏安法可以有效的研究光泽汀与DNA之间的相互作用。在4.5mLpH7.41BR缓冲液中，加入0.5mL1×10-3mol/LLuc溶液,用上述三电极系统测定体系的循环伏安曲线；然后加入不同量的鲱鱼精DNA，充分作用后测定相应的循环伏安曲线。仪器条件：扫描速度0

4、.3V/s，起始电位-1.5V，最高电位0.8V，最低电位-1.5V，取样间隔0.001V，静止时间2S。2结果与讨论1材料与方法1.1仪器与试剂F320荧光分光光度计，天津港东科技发展股份有限公司；PHS-25CW微机型精密酸度计，上海思龙科学仪器有限公司；Cary60紫外可见分光光度计，Agilent,美国。光泽汀，上海复奇医药；鲱鱼精DNA，sigma公司，其纯度以A260/A280>1.8衡量，浓度用260nm处的吸光度来确定（ε=6600L/(mol·cm)）；溴化乙锭，北京拜尔迪生物技术有限公司；BR缓冲溶液（pH7.41）。所用试剂皆为分析纯。水。———————————

5、——————————————————————————————————————————图12.1的BR缓冲溶液中的2所示，在Luc中滴加DNA后（由DNA的电子吸收光谱呈一条直，Luc的特征峰明显降低，Luc与DNA之间发生了1.2试验方法1.2.1紫外可见光谱法在1cm比色皿中，Luc次滴加10uL配制和水浴加热，从30℃升温至1005A0/A~t图。图2Luc与DNA相互作用的吸收光谱Fig.2AbsorptionspectraoftheinteractionbetweenLucandDNA注：c(DNA)=1.77×10-4mol/L；c(Luc)=2×10-4mol/L；pH=7.4

6、1；(1)Luc(2)Luc-DNA。EB溶液，用DNADNA溶液浓度，滴加EB在1cm3mLEB-DNA溶液，用一定浓度Luc溶液滴定，扫描荧光光谱。2.1.2Luc与DNA的结合比在pH7.41的BR缓冲溶液中，固定Luc的浓度，逐滴加入DNA溶液，在431nm处测定体系吸光度值。随着DNA浓度增加，体系吸光度值呈下降趋势，当DNA浓度达到1×10-4mol/L时，体系吸光度变化趋于一致，结果如图3所示，这表明Luc与DNA形成了n(Luc):n(DNA)=2:1型复合物[8]。根据Beer定律，可1.2.3循环伏安法——————————————————————————————————

7、———————————————————以pH7.41BR缓冲液为底液，加入一定量1×10-3mol/LLuc溶液，用上述三电极系统，改变扫速、底液及pH值，分别测定相应的循环伏安曲线。仪器条件：起始电位-0.6V，最高电位1.0V，最低电位-0.6V，取样间隔0.001V，静止时间2S。44现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2014,Vol.30,No.12以知道Luc-DNA型复合