2009上微生物学实验 讲稿

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1、实验一培养基的制作及灭菌（4学时P78~104）一、实验目的明确培养基的配制原理；掌握细菌和真菌培养基的制备方法和步骤。二、实验原理1、培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基，由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏，蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁

2、殖。在配方中不加琼脂时称之为肉汤培养基，常用于扩大培养；加入琼脂配制的固体培养基一般用于细菌的分离培养、测数等。马铃薯蔗糖培养基是一种半合成培养基，常用于培养多种真菌，如酵母、霉菌和蕈菌（食用菌）等。2、灭菌灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外所有的微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称为灭菌。分干热和湿热灭菌。一般培养基使用高压蒸汽灭菌，0.1MPa，灭菌15～30min。P100～103消毒：用较温和的物理或化学方法杀死病原微生物和有害微生物等绝大多数微生物，即部分灭菌。三、主要实验器材1、药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10%Na

3、OH溶液、10%盐酸溶液；新鲜马铃薯、蔗糖（葡萄糖）。2、器材：小烧杯、小铝锅、天平、牛角匙、1000mL刻度搪瓷杯、玻棒、pH试纸、试管、分装漏斗、棉花、棉线；天平、小刀、纱布、试管、菜板；高压蒸汽灭菌锅。四、实验掌握要点试管、三角瓶的包扎；培养基的分装；灭菌参数。15五、实验内容与操作：（一）培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，琼脂20g，水1000mL，pH7.0。2、马铃薯蔗糖培养基的配制（P214）去皮马铃薯小块200g，蔗糖（或葡萄糖）20g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。（

4、二）操作步骤分四组：一、二组分别做牛膏斜面和三角瓶，三、四组做马铃薯的斜面和三角瓶。1、配制牛肉膏蛋白胨培养基操作步骤（1）按配方称取药品，加入盛有500mL水的铝锅中，加热溶解药品。（2）再加入洗净的琼脂条（粉），搅拌、加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000mL。（3）用玻棒沾少许溶液，测定pH值，用NaOH或HCl调节pH至7.0。（4）用分装漏斗装入18mm×180mm试管（6～8mL）中，塞好棉塞，用报纸或牛皮纸包扎棉塞部分，直立装入试管篓中，放入高压灭菌锅内，于121℃，0.1MPa，灭菌30min。（5）灭菌后，趁热摆放斜面。冷却

5、后，于37℃培养24h做无菌检测。2、配制马铃薯蔗糖培养基操作步骤（1）马铃薯去皮，称取200g，切成1cm小方块，置入小铝锅中，加1000mL水，置电炉上煮沸20min，用双层纱布过滤。将滤液补水至1000mL煮沸。（2）加入蔗糖、洗净的琼脂条（粉），搅拌、加热至琼脂完全熔化，再补足水量至1000mL。（3）分装、灭菌、摆放斜面，操作同上。六、作业与思考题1、培养细菌常用的培养基？什么肉汤培养基？2、培养真菌的常用培养基？15实验二显微镜的使用及蓝细菌和酵母菌的形态观察（4学时p1～35，47，53）一、实验目的熟练掌握光学显微镜使用方法，

6、利用水浸片法观察酵母菌、蓝细菌的形态特征。二、实验原理1、普通光学显微镜的构造、成像原理、性能及使用方法P1～92、蓝细菌P47是光能营养菌，广泛分布于自然界中，在极端环境中也能生长。部分蓝细菌还具有固定空气中氮素的能力，一些蓝细菌还能与真菌、苔藓、蕨类和种子植物共生，如念珠藻与真菌共生形成地衣（地木耳）。最简单的蓝细菌为杆状或球形的单细胞生物，多数则形成不分枝的丝状体，由许多单个细胞联成一串，并为一共同的胶质鞘套包被。蓝细菌主要进行分裂繁殖，单细胞蓝细菌分裂后形成群体，包围在胶质层内。丝状蓝细菌细胞在鞘内排成行，通过细胞分裂使菌丝加长，菌丝

7、不分枝，但有时有假分枝。某些丝状蓝细菌能在丝状体中间或顶部产生异形胞，异形胞比营养体稍大，壁厚，两端有极节，只含有叶绿素a，是固氮蓝细菌固氮的场所。另一些蓝细菌可形成由营养细胞膨大、细胞壁加厚的厚垣孢子。在不良环境下，厚垣孢子可处于休眠状态，待环境适宜时，孢子再萌发成新菌丝。3、酵母菌课本48~51呈球状、卵圆状、椭圆状、柱状和香肠状，无性繁殖多营出牙方式。最典型和最重要的酵母菌为酿酒酵母，形态：球状、卵圆状或椭圆状。三、实验器材1、菌种：干地衣；酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）斜面菌种。2、器材：克氏培养基或麦氏培

8、养基的试管斜面，载玻片、盖玻片、接种环、蒸馏水、滴管和显微镜。四、实验掌握要点1、显微镜的基本结构、原理、性能及使用方法。2、无菌操作技术。3、水浸片的制作。15五