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时间:2018-07-15
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1、联合检测PTENLivinILKBaxP27kip1及Caspase-9蛋白在胃癌及其癌前病变中表达及意义【中图分类号】R806【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)07-0385-02胃癌是常见的恶性肿瘤之一,胃癌及癌前病变的发生是一个多基因、多步骤、多因素和多阶段综合作用的结果[1]。因此,在胃癌组织中研究细胞周期调控因子的表达对于肿瘤发生、发展生物学机制的阐明具有重要意义。而PTEN、Livin、ILK、Bax、P27kip1和Caspase-9蛋白是细胞周期调控因子的重要成分,检测其在胃癌和癌前病变中的表达,旨在探讨人工调节基因水平及干涉其作
2、用通路成为诊治胃癌的新方法。1材料与方法1.1材料:选取我院2009年1月-2011年6月50例胃癌手术切除标本,癌前病变18例,其中肠上皮化生8例、不典型增生10例。每例选取蜡块4?m连续切片1-2张,进行常规HE染色和免疫组化染色。5癌旁组织距瘤缘约5cm,均经病理学确认为正常组织作为对照。所有患者术前均未接受化疗、放疗或其他对肿瘤的治疗,新鲜组织采用手术分离。本研究中50例胃癌组中包括30位男性和20位女性,年龄范围是32-78岁,平均年龄为55岁。18例胃癌前病变组中包括12位男性和6位女性,年龄范围是30-58岁,平均年龄为44岁。1.2方法:免疫组化测定,免疫组化设
3、阳性、阴性对照。PTEN、Livin、ILK、Bax、P27kip1和Caspase-9,每张切片在400倍光镜视野下分别取上、下、左、右及中心共5个区域进行细胞计数,每个区计数200个细胞,共计1000个细胞,计算染色细胞所占比例。细胞核或胞浆内出现棕黄色颗粒为PTEN、P27kip1、Caspase-9、Livin染色阳性,胞质(胞膜)出现棕黄色颗粒为ILK、Bax、染色阳性;阳性细胞数<10%为二者表达阴性;阳性细胞数�10%为二者表达阳性。2结果PTEN、Livin、ILK、Bax、P27kip1和Caspase-9在50例胃癌组、正常黏膜组及18例胃癌前病变组中的表达
4、。5PTEN胃癌组表达58.7%明显低于正常组93%,肠上皮化生、不典型增生阳性表达率分别为67%、69%,(P<0.05)呈逐渐下降趋势;Livin、胃癌组表达58%明显高于正常组9%,肠上皮化生、不典型增生阳性表达率分别为35%、39%,(P<0.05)呈逐渐上升趋势;ILK胃癌组表达40.2%明显高于正常组5%,肠上皮化生19.8%、不典型增生29.8%(P<0.05)呈逐渐上升趋势;P27kip1胃癌组表达38%明显低于正常组99.3%,肠上皮化生70.3%、不典型增生44.8%(P<0.05)呈逐渐下降趋势;Caspase-9蛋白在胃癌组表达39.78%明显低于正常组
5、99.8%,肠上皮化生、不典型增生阳性表达率分别为50.78%、42.9%,(P<0.05)呈逐渐下降趋势;Bax胃癌组表达35.2%明显低于正常组98.7%,肠上皮化生、不典型增生阳性表达率分别为57%、58%,(P<0.05)呈逐渐下降趋势。3讨论3.1P27kip1是CDKIs(细胞周期素依赖激酶抑制剂)家族成员之一,对肿瘤细胞的增殖起负性调节的作用。P27kip1蛋白对细胞周期负性调控作用主要是通过抑制Cyclin-CDKs复合物的激活或抑制已激活的Cycline-CDK复合物的活性来实现的,使得细胞生长停滞,从而调控着细胞的生存与增殖。3.2Caspase-9属于半胱
6、氨酸蛋白酶家族,是一组细胞凋亡蛋白,以无活性的酶原形式存在于细胞中。由于Caspase可自我活化并能互相激活,因此凋亡过程一旦发生,即呈现级联放大效应。而Caspase-9是位于级联反应上游的最重要的起始因子之一,在其他蛋白参与下发生自我激化并激活下游的Caspase因子,进而引起级联放大效应导致细胞凋亡。因此,Caspase-9会成为免疫干预的合适目标[3]。53.3ILK是新近发现的一个具有3个结构单位的Ser/Thr蛋白激酶,作为整合素和生长因子受体信号传导途径中的一个重要效应物,ILK调节着细胞的粘附、生存、分化和凋亡。其相关蛋白IKB、GSK3等是细胞程序死亡和细胞周
7、期循环的重要调节蛋白。本组ILK在胃癌组织的阳性表达率为40%,这说明ILK表达与肿瘤组织相关。3.4Bax是Bcl-2基因家族中的一员,Bax促进细胞凋亡主要是通过加速线粒体中的cyt-c释放和增加Caspase的活性来实现的,因此Bax在胃癌的发生发展中可能起重要的作用。本实验显示结果得出癌前病变已经带有更多的癌细胞生物学特征和基因表达特点,在多种致癌因素的作用下,癌前病变有可能发展为癌。3.5Livin是最近发现的凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中的新成员,主要呈丝状表达于细胞质,同时也表
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