资源描述：
《比较胰酶-edta两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒2bs消化效果研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒2BS消化效果研究【摘要】目的比较胰酶和EDTA两种消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞冻融后的病毒滴度（VT）。方法分别配制两种浓度的胰酶和EDTA：0.125%、0.25%的胰酶，0.01%、0.02%的EDTA各1000ml，按比例加入预先培养好的携带水痘-带疱疹病毒的等量2BS细胞中，消化后，用显微镜观察细胞形态，消化液离心、浓缩、冻融、检测并比较病毒滴度。结果与0.125%、0.25%的胰酶、0.01%EDTA，0.25%的胰酶与0.02%的ED
2、TA混合消化液相比，用0.02%的EDTA消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞，冻融后的病毒滴度提高了1.3～0.8个log值。结论用0.2%EDTA消化液消化的含有水痘病毒的细胞获得的病毒滴度最好。【关键词】胰酶;EDTA;2BS细胞;病毒滴度【Abstract】ObjectiveTheanalysisofthehealingeffecttwodigestivetrypsinandEDTAdigestionandchickenpox-herpeszostervirus2BScellsafterfreez
3、ingandthawingofthevirustiter（VT）.MethodsThepreparationoftwoconcentrationsoftrypsinandEDTA:0.125%,0.25%trypsin,0.01%,0.02%EDTAall1000ml,addedinproportiontocarryagood6pre-trainingvaricella-zosterviruswiththeequivalent2BScells,digestion,cellmorphologywasobserved
4、withamicroscope,centrifugedigestion,concentration,freeze-thaw,testandcomparethevirustiters.ResultsAnd0.125%,0.25%trypsin,0.01%EDTA,0.25%trypsinand0.02%EDTAmixtureofdigestivejuice,comparedwith0.02%EDTAdigestiondigestiveinfectionofvaricella-zostervirus2BScells,
5、thevirustiterafterfreezingandthawingincreased1.3～0.8alogvalue.ConclusionDigestionwith0.2%EDTAdigestionofcellscontainingvaricellavirustiterobtainedbythebest.【Keywords】Trypsin,EDTA;2BScells;Virustiters6水痘疫苗作为预防水痘-带状疱疹病毒的唯一有效制剂已问世多年，主要用2BS细胞培养病毒并制备疫苗，疫苗的制备工艺也以2B
6、S细胞的转瓶培养代替其细胞的静止培养［1］，生产工艺中细胞消化是工艺必不可少的步骤，直接影响疫苗的质量，是生产工艺的关键点，以往没有文献报道，细胞消化一般采用胰酶和EDTA［2］，本研究主要以不同浓度的胰酶和EDTA消化细胞，冻融后通过细胞形态和病毒滴度检测，对疫苗的质量进行比较，该研究为生产高质量疫苗提供试验依据。两者虽然都是从培养皿上消化细胞，但取得的结果不同。作者主要是总结比较，通过不同消化液的消化方式，哪种方式获得的细胞利于冻融，不影响细胞内病毒存活，生产时获得高滴度疫苗。1材料与方法1.1材料及仪器设备
7、2BS细胞（人胚肺二倍体细胞由国家药品当局批准的二倍体细胞2BS）1.2胰酶（trypsin美国Becton,Dickinsonandcompany）1.3EDTA（Ethylenediaminetetraaceticaciddisodiumsalt国药集团化学试剂有限公司）1.4显微镜（型号XDS-1B厂家：重庆光学仪器厂）1.5转瓶机（型号GD/T76厂家：长城仪器设备厂）1.6细胞培养液：细胞培养液为含10%灭活小牛血清的Eagle’sMEM液，PH为7.2～7.3。2方法2.1配制0.125%、0.25%
8、的胰酶细胞消化液分别称取胰酶粉末1.25g、2.5g,先用少许灭菌过的PBS调成糊状，分别定容至1000ml，室温搅拌至溶解，除菌过滤，分装，4℃保存备用。2.2配制0.01%、EDTA细胞消化液秤取EDTA0.1g、Nacl4.45g,KCl0.1g,NaHPO4�12h2O1.45g,KH2PO40.16g,先用少许灭菌注射用水溶解，然后定容至1000ml.2.3配制
