细胞传感器及纳米材料生物相容性研究

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1、细胞传感器及纳米材料生物相容性研究湖南大学博士学位论文细胞传感器及纳米材料生物相容性研究姓名：肖锡林申请学位级别：博士专业：分析化学指导教师：姚守拙;蔡青云20100101博士学位论文摘要本论文开展了细胞传感新方法和纳米材料生物相容性的研究。纳米生物材料是纳米材料和生物材料交叉而成的一个全新领域。纳米尺度的特殊生物效应使得纳米生物材料具有广泛的应用前景。细胞体外分析对细胞生理学行为的研究以及药物的体外筛选都具有重要意义。纳米生物材料细胞相容性界面的构建对促进细胞传感器的研制、组织工程的发展和组织工程材料的临床应用都起着重要的作用。磁弹性传感器是近几年迅速发展起来的无线无源传感器，在活

2、体、在体及无损检测等领域具有广泛的应用前景，特别适用于需无菌操作如细胞检测的科学实验中。另外，细胞的新陈代谢、呼吸作用、光合作用、信息传递、物质的跨膜运输等活动都涉及到细胞荷电粒子或电活性粒子的定向有序传递、传导或转移，即涉及到细胞物质有序、专一、特异的氧化和还原。电化学方法具有简单、快速、方便等优点。因此，可用电化学手段研究细胞的生理行为或评估药物与细胞的相互作用等。基于上述描述，本论文主要进行了以下几方面的研究工作：1．乳腺癌细胞MCF．7无线磁弹性传感器制各及应用。本工作应用无线传感器原位监测了MCF．7细胞的正常生长及抗癌药物作用下的生长过程，评价了5．氟尿嘧啶和顺铂对MCF

3、．7细胞生长的抑制效果。无线传感器是由非晶态金属铁合金磁条带切割而成的矩形磁振片，表面涂一层聚氨酯膜保护磁振片不被氧化腐蚀，提供一个细胞相容性好的细胞生长附着面。传感器在一定频率范围内的激发磁场中振动，振动产生的电磁流可以通过感应线圈远距离遥感检测，而传感器与检测系统无需任何物理连接，这一特性有利于实现生物实验过程的无菌操作，特别是细胞培养过程。MCF．7细胞贴附在传感器表面生长，可引起传感器共振振辐减小，并且共振振幅的减少与细胞的初始接种浓度成线性关系，线性范围为5×l04～l×106cellscellsmL一，检出限为1．2×104mL～。本工作中通过增大激发共振振辐来评价细胞贴

4、壁的生长能力，并用磁传感器评价了5．氟尿嘧啶和顺铂这两种抗癌药物对MCF．7细胞生长的抑制作用。当MCF．7细胞生长到202．西幽P，．记^砌cD，f0157：H7EcD，f0157：H7无线磁弹性传感器制备及应用。以预聚合了聚氨酯膜的磁性膜片为敏感元件，制备了无线磁弹性微生物传感器；研究了微生物生长导致培养基性质如黏度、密度等改变对传感器共振频率的影响，考察了细菌在传感器表面吸附对传感器响应的贡献；研究了庆大霉素注射液对E．cD，f0157：H7生长的抑制作用，依据庆大霉素注射液对细菌的抑制作cD，f用可以进行抗生素的药效评测。E0157：H7的生长和繁殖导致溶液黏度减小，从而引起

5、磁弹性传感器共振频率增大；细菌生长过程中在传感器表面有一定吸附，从而引起传感器共振频率减小，溶液性质变化和细菌吸附程度共同影响共细胞传感器及纳米材料生物相容性研究co，fcells振频率的变化。该传感器可测定的E0157：H7浓度为2×102～3×10602cellsmL一，检测限为1mL～。基于此，建立了可用于细菌早期诊断和快速分析的无线磁弹性传感检测新方法。3．支原体无线磁弹性传感器制备及应用。支原体是最小、最简单、能够自我复制的无细胞壁致病微生物。本文应用无线磁弹性传感器实时监测了生殖支原体的正常生长及抗生素抑制生长过程，评价了四环素和左氧氟沙星对生殖支原体的抑制效果。无线传感

6、器是由28um厚的带状非晶态铁磁合金2826MBFe40Ni38M04Bl8切割而成的矩形磁振片，表面涂一层聚氨基甲酸酯膜保护磁振片不被氧化腐蚀，为生殖支原体提供了一个生长附着面。传感器在一定频率范围内的激发磁场中纵向振动，振动产生的磁通量可以通过感应线圈远距离遥感检测，而传感器与检测系统无需任何物理连接，这一特性有利于实现生殖支原体培养过程的无菌操作。生殖支原体黏附在传感器表面生长使传感器共振频率下降，共振频率下降值与生殖支原体的接种浓度存在线性关系，通过细菌生长抑制实验h时，四环评价了两种抗生素的抑制效果。由实验得到，当细菌生长时间为120mL～。素的平均抑制浓度MIC50为1．

7、5mL～，左氧氟沙星的MIC50为0．5pgpg4．大肠杆菌碳纳米管方波伏安传感器制备及应用。采用循环伏安和方波伏安技术研究了多壁碳纳米管MWCNTS修饰玻碳电极上大肠杆菌细胞的电化学行为。与裸玻碳电极相比，修饰电极对细胞悬浮液中电化学活性物质的氧化有催化作用。在细胞生长过程中，各个时期的细胞活性与方波伏安分析信号趋势一致。利用该技术评估了抗生素庆大霉素对大肠杆菌细胞的活性抑制作用，同时用形态学技术进行了验证。Ti片阳极氧化技术制得管径大约为100nm，且