液相色谱仪检测土霉素、四环素、金霉素

《液相色谱仪检测土霉素、四环素、金霉素》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、应对中华人民共和国国务院令第609号《饲料和饲料添加剂管理条例》液相色谱仪检测举例用LC-5500液相色谱仪检测土霉素、四环素、金霉素1.1.1仪器LC5500高效液相色谱仪；溶剂过滤器；回旋振荡器；离心机。1.1仪器条件检测器：紫外可见检测器；检测波长：355nm；色谱柱：C18柱4.6mm*250mm；流动相：乙腈＋0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30％硝酸调节pH值为2.5）=25＋75；流速：1mL/min；柱温：室温；进样量：20μL。根据GB/T5009.116-2003畜、禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定（高

2、效液相色谱法）的要求，色谱柱应为ODS-C18（5μm）6.2mm*150mm，流动相乙腈＋0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30％硝酸调节pH值为2.5）＝35＋65，由于我们试验所用色谱柱为4.6mm*250mm，所以经过试验得出最好用乙腈＋0.01mol/L磷酸二氢钠溶液（用30％硝酸调节pH值为2.5）＝25＋75的流动相，这样既可以在较短的时间内完成一次检测，又可以得到很好的分离，如图1所示。图1混合标样色谱图高效液相色谱法检测饲料中的氨基酸1.1仪器及试剂1.1.1试剂及试剂的配制1.1.1.1乙腈（色谱纯）；1.1.1

3、.2水（超纯水）；1.1.1.3醋酸钠（分析纯）；1.1.1.4冰乙酸（分析纯）；1.1.1.5叠氮化钠（分析纯）；1.1.1.6N，N-二甲基甲酰胺（分析纯）；1.1.1.7碳酸氢钠（优级纯）；1.1.1.8磷酸二氢钾（优级纯）；1.1.1.9氢氧化钠（优级纯）；1.1.1.10色氨酸标样（中国标准物质中心）；1.1.1.1117种氨基酸混合标样（中国标准物质中心，混合标样中17种氨基酸的浓度见表一）；表一十七种氨基酸标样中各氨基酸浓度浓度浓度中文名称简称分子量（μmol/mL）（mg/100mL）天冬氨酸Asp133.1226.6

4、2谷氨酸Glu147.1229.42丝氨酸Ser105.1221.02精氨酸Arg174.2234.84甘氨酸Gly75.1215.01苏氨酸Thr119.1223.82脯氨酸Pro115.1446.05丙氨酸Ala89.1217.82缬氨酸Val117.1223.44蛋氨酸Met149.2229.84半胱氨酸Cys121.2224.24异亮氨酸Ile131.2226.24亮氨酸Leu131.2226.24苯丙氨酸Phe165.2233.04组氨酸His155.2231.04赖氨酸Lys146.2229.24酪氨酸Tyr181.223

5、6.241.1.1.12饲料参比（中国标准物质中心，饲料参比的百分含量见表二）；表二饲料参比的百分含量序号中文名称简称百分含量（%）1天冬氨酸Asp1.562谷氨酸Glu3.243丝氨酸Ser0.944精氨酸Arg1.255甘氨酸Gly1.286苏氨酸Thr0.747脯氨酸Pro1.408丙氨酸Ala1.189缬氨酸Val0.9210蛋氨酸Met0.5411半胱氨酸Cys0.3412异亮氨酸Ile0.7613亮氨酸Leu1.6814苯丙氨酸Phe1.0015组氨酸His0.5016赖氨酸Lys1.0817酪氨酸Tyr0.65合计19.

6、061.1.1.13色氨酸标样配制：称取适量色氨酸标准品，用氢氧化钠溶液溶解配制成浓度为2μmol/mL溶液，即20.42mg/100mL；1.1.1.146mol/L盐酸配制：用浓盐酸和水1：1配置即可；1.1.1.155mol/L氢氧化钠的配制：称取200g氢氧化钠配成1L水溶液；1.1.1.160.1mol/L氢氧化钠溶液：称取0.4g氢氧化钠配成100mL水溶液；1.1.1.17衍生缓冲液：4%碳酸氢钠水溶液；1.1.1.18衍生试剂：适量衍生试剂用乙腈定容为100mL；1.1.1.19平衡缓冲液：0.68%磷酸二氢钾水溶液。

7、1.1.2仪器LC-5500高效液相色谱仪：北京东西分析仪器有限公司大连依利特AAK氨基酸专用柱（4.6mm×250mm）水解管：硬质玻璃管，体积20～30mL恒温干燥箱、真空泵、漩涡混匀器、酒精喷灯等1.2仪器条件检测器：紫外可见检测器；检测波长：360nm；色谱柱：AAK氨基酸专用柱（4.6mm×250mm）；流动相：流动相A：乙腈：水＝1：1；流动相B：0.05mol/L醋酸钠溶液（称取4.1g醋酸钠，0.4g叠氮化钠，加水900mL溶解，加入10mLN，N－二甲基甲酰胺，用冰乙酸调pH值为6.4，用水定容为1000mL）；流速

8、：1.2mL/min；柱温：27℃；进样量：20μL。表三梯度洗脱时间表时间（min）00.349.5172028343738流动相A1616313655556510010016流动相B84846964454535008