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1、血浆凝固酶阴性葡萄球菌的分子生物学研究进展刘渠1综述叶梅君2审校近年来许多文献报道血浆凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase2NegativeStaphylococci,简称CNS)是重要的医学感染病原菌。迫切需要建立鉴定特定菌株的有效方法。从常规分类方法如生化、耐药谱、血清学、噬菌体、粘质产生等发展到了分子生物学研究阶段。对CNS的染色体、质粒等进行了大量研究,从而建立了相应的分子生物学诊断技术,提高了CNS分112质粒图谱分析应用Parisi等10首先应用质粒图谱鉴定CNS的不同菌株发现:具有噬菌体分型、生
2、化分型、耐药谱分型相同的菌株具有不同的质粒谱。Edward等11用生化分型发现病人血培养CNS与皮肤定植CNS其有相同生化型,认为病人CNS感染来自皮肤定植菌,但质粒分析显示了不同质粒谱,从而证实了是两种不同来源的菌株。Pirkko12用该技术证实了耐环丙沙星菌株具有相同质粒谱,表明是该菌株的耐药质粒流行,导致了该医院接受环丙沙星治疗病人间型、鉴定的准确性,面作出了贡献。尤其对CNS耐药性基因研究方1质粒图谱分析质粒是细菌除染色体外的遗传物质,一般是一个共价、闭合、环状双股DNA。在一定时间内,细菌所携带的质粒
3、保持相对稳定1。质粒提取后,经琼脂糖凝胶电泳。因其迁移率与分子量的对数呈负相CNS的交叉感染。Schmiolt13利用该技术在污染菌与感染菌鉴定方面取得了满意的结果。在CNS流行病学传染源追踪方面,质粒分析是一个有力工具。Thurn14等人应用质粒分析发现院内感染是由于医务人员CNS与病人之间的相互交关2,则在凝胶上出现对应的质粒DNA谱带。该技叉感染所致。Herwaldt15用该技术证实了口腔粘膜术快速、简便、特异、易推广。某一菌株所带质粒的全部情况构成了其特性,这是质粒图谱分析的基础。特异性质粒图谱是菌株流
4、行和质粒流行的重要依据。在分析质粒结果时,应注意质粒的构型变化,舒是免疫缺陷患者CNS菌血症的主要入侵部位。李倩等从烧伤病房一次葡萄球菌感染调查中发现一个与感染病人密切接触的临床医生的手充当了传播媒介,并证明了金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌之间有质粒传递。在耐药基因的研究方面,很多资料16泉3等应用凝胶二步电泳法鉴别质粒谱中CCC型质粒带和被染色体的DNA带所掩蔽的质粒对OC型质粒获得成功。显示CNS与金黄色葡萄球菌之间的质粒转移16,17。对于这种质粒转移现象,没有质粒分析很难发现其相互关系。CNS可能充当了金
5、黄色葡萄球菌耐药基因的宿主18。也有将耐药基因从金黄色葡萄球菌传递给CNS的报道19。但质粒图谱分析也存在一些不足之处,其应用也受到一定限制。(1)质粒在菌株多次传代后易造成丢失现象,此时,可信度低,但在一定时间内是稳定的。(2)当细菌接受了新质粒,其表型在一定时期不变,但其质粒谱已改变。(3)DNA构型的改变,易出现假阳性质粒带。(4)对只携一个质粒或无质粒CNS质粒提取CNS质粒的提取方法中关键是细胞壁的裂解,一般裂解细菌细胞壁的方法有碱性裂解法4、酶裂解法5、SDS裂解法6、煮沸法7、酚—氯仿裂解法8、蔗
6、糖曲拉通X2100裂解法9。其中后两种方法勿需溶菌酶、溶葡萄素等造价高昂的酶,且条件温和,不易使质粒构型改变,适合于革兰氏阳性、阴性菌的质粒提取,是一般实验室均能开展的一种方法。1111深圳市龙岗区卫生防疫站,深圳5181162华西医科大学公共卫生学院1997—08—26收稿的CNS菌株,方法。该分析严重受限,应借助其它更可靠图谱进行RFLP分析的一类方法。探针的应用,使分析的RFLP谱带减少至几条或一条,结果易观察,方法的分辨率高,重现性好,适合于CNS分型及流行病学研究。目前用于CNS分析的探针有(1)大肠
7、杆限制性内切酶片段长度多态性分析2(RFLP)在CNS分子流行病学研究中的应用分析细菌染色体DNA就克服了质粒图谱分析存在的某些不足。染色体编码的遗传信息较稳定,不同菌株其表型各异,在基因水平上主要是染色体DNA的核苷酸排列各异。各内切酶切点不同,据染菌质粒DNA探针。Zuria22等用PKK载体质粒构3535建的大肠杆菌基因库中,选出715kbBamHI片段的rDNA制成探针,对86株表皮葡萄球菌用EcoRI消化后,获得11种不同的杂交RFLP谱型;用Hindￋ色体DNA的酶切谱的相似程度,判定各菌株的差消化
8、后,获得10种不同的杂交RFLP谱型,把CNS的可鉴别能力提高了近20%。法国的Walcher26用异。RFLP鉴定CNS较质粒谱稳定、准确、可靠,两法在鉴定同一CNS时,不存在某种相关关系。限制大肠杆菌PBA、PsFA、Pip1307质粒制备的213kb、2815性内切酶是细菌产生的一类防范外源DNA酶,能115kb、211kbDNA探针,用EcoRI、Hindￋ消化染色体DNA,对
