基于乙肝表面抗原与肠道病毒71型中和表位的设计与研究

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1、JDFJKDHFKAHGJHLKFHJHAKHFLJKDHFKLJASHDFKJHAKLDFHDLSFHKLDSJ本科生毕业论文（设计）题目:基于乙肝表面抗原与肠道病毒71型中和表位的病毒样颗粒在植物中的表达与鉴定姓名:李大鹏学院:动物医学院专业:动物医学班级:动医51学号:1715133指导教师:黄忠孙钦伟职称:研究员讲师2010年5月18日南京农业大学教务处制DFSGSJDFKGHERUHJKDHKLSHDKJHKSHKFHLKGHDLSFGHDSKLFHGLDKSFHGLKFGDSJDFJKDHFKAHGJHLKFHJH

2、AKHFLJKDHFKLJASHDFKJHAKLDFHDLSFHKLDSJ目录摘要……………………………………………………………………………………………3关键词…………………………………………………………………………………………3Abstract………………………………………………………………………..……………….3Keywords……………………………………………………………...………………………3引言…………………………………………………………………...………………………31材料与方法…………………………………………

3、………………………….……………41.1重组质粒的构建………………………………………………………………………….41.2在烟草中的农杆菌介导表达…………………………………………………………..…41.3蛋白的提取与定量………………………………………………………………………..61.4免疫印迹………………………………………………………………….……………61.5蔗糖密度梯度离心………………………………………………………………..………62结果………………………………………………….………………………………………62.1重组农杆菌

4、的构建与转染………………………………………………………………..72.2重组融合蛋白表达的检测…………………………………………………………....….72.2.1融合蛋白表达量的检测………………………………………………………….…….72.2.2免疫印迹…………………………….............………………………….……………72.3病毒样颗粒(VLPs)组装的检测…………............………………………….……………83讨论…………………………………………………………….……………………………83.1基于HB

5、sAg的外源性表位呈递模型的建立…………………………....………………83.2农杆菌介导的瞬时表达系统与融合蛋白的表达量…………..…………………………83.3基于HBsAg的重组VLPs的抗原性分析……………...…………………………………9致谢……………………………………………………………………………...……………10参考文献……………………………………………………………………………...………10图1植物重组表达载体的构建…………………..………………..…………………………5图2SP70，SP55在NcoI位点的插

6、入………………..…………..……………………………5图3农杆菌pICH-GFP感染叶片7d后GFP在叶片中的表达……………….……………7图4-a融合蛋白中HBsAg表达量的检测……………………………………………………7图4-b融合蛋白中HBsAg与TSP的比例……………………………………………………7图5WesternBlot检测HBsAg，SP70-HBsAg与HBsAg-SP70的表达…....…………………8DFSGSJDFKGHERUHJKDHKLSHDKJHKSHKFHLKGHDLSFGHDSKLFHGLDKSF

7、HGLKFGDSJDFJKDHFKAHGJHLKFHJHAKHFLJKDHFKLJASHDFKJHAKLDFHDLSFHKLDSJ图6蔗糖密度梯度离心的夹心ELISA检测结果……………………………………………8图7HBsAg，SP70-HBsAg与HBsAg-SP70的亲水性，抗原性与表面可能性分析…………9基于乙肝表面抗原与肠道病毒71型中和表位的病毒样颗粒在植物中的表达与鉴定动物医学专业学生李大鹏指导教师黄忠孙钦伟摘要：肠道病毒71型（Enterovirus71，EV71）是引起手足口病的主要病原体，目前尚未有商品化疫苗上

8、市，如何研制出廉价，规模化，且能诱导出广谱中和抗体的疫苗是目前需要解决的问题。SP70和SP55是EV71的VP1衣壳蛋白上两个高度保守的线性中和表位。我们将SP70和SP55融合在乙肝表面抗原（hepatitisBsurfaceantigen，HBsAg）的N端或C端，将H