动物皮肤致敏试验

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1、动物皮肤致敏试验（GPMT试验）一试验目的采用将受试作用物作用于动物的最大剂量技术，对材料在试验条件下使动物产生皮肤致敏反应的潜在性做出评价。二试验材料1．待检材料1.1待检物：xxx培养基浸提液（无菌）1.2纯度：浸提液原浓度1.3溶剂：培养基1.4样品形状：浸提液1.5浸提方法：24±1h，37℃2．阳性对照2.4-二硝基氯苯配制成浓度为40ml/L的橄榄油溶液，经60Co照射14h消毒，在(37±1)℃，静置24h。2．受试动物2.1种属品系：豚鼠2.2来源：2.3体重：300～500g2.4性别：雌雄

2、兼半2.5动物数：X只。2.6饲养条件：全价营养颗粒饲料喂食，分笼饲养于空调室内，室温21±2℃，相对湿度40~70%，每天光照12小时，自由饮用自来水。给药前适应性饲养三天。三试验方法1.确定主试验皮内诱导阶段的浓度将材料的浸提液用生理盐水配成如下浓度：浸提液原浓度、1/2原浓度、1/4原浓度、1/8原浓度，每种浓度的浸提液皮内注射3只豚鼠，每点注射0.1ml。2，4-二硝基氯苯用橄榄油调节为40、20、l0、5ml/L4种浓度，每浓度注射3只豚鼠，在胸廓的背前区进行皮内注射。观察各动物的局部及全身情况。主

3、试验皮内诱导阶段所选择的最高浓度，以不导致皮肤大面积损伤及对动物产生其它有害作用为标准。3只动物皮内注射生理盐水作阴性对照。2．确定主试验局部诱导阶段和局部激发阶段的浓度将材料的浸提液用生理盐水配制成浓度:浸提液原浓度、1/2原浓度、1/4原浓度、1/8原浓度，分别浸透滤纸片后贴敷于动物腹侧部，用封闭式包扎带包扎固定。每种浓度用4只豚鼠。24h后除去包扎带和滤纸片。2，4-二硝基氯苯用40、20、l0、5ml/L4种浓度同法进行试验。4只动物用生理盐水同法进行试验作阴性对照。在可能的情况下，以可导致动物轻度红

4、斑，但不对动物产生其他有害作用的浓度为主试验局部诱导阶段的浓度。选择不产生红斑反应的浓度为主试验局部激发阶段的浓度.3．主试验第9天，提取白化豚鼠60只，分成4组，每组15只，开始适应环境。第15天，在胸廓的背前区备皮(4cm×6cm)。3.1皮内诱导阶段第l6天在每只动物去毛的肩胛骨内侧部位成对皮内注射0．1ml。其中靠近头部的2点注射完全弗氏佐剂与生理盐水的等体积混合液；中间2点注射预试验时表l确定的浓度的浸提液，阴性对照组则注射生理盐水；靠近尾部的2点注射前2种注射液的等体积混合物。表1各组材料浸提液在

5、主试验各阶段的浓度材料皮内诱导阶段局部诱导阶段局部激发阶段浸提液浸提液原浓度浸提液原浓度浸提液原浓度2.4-二硝基氯苯20205生理盐水相应体积量相应体积量相应体积量ABCABC头部尾部去毛的肩胛骨内侧部位图2皮内注射点部位注：A、B、C、D为0.1mL皮内注射点3.2局部诱导阶段第23天，各组分别用表1选定的浓度，将20mm×40mm滤纸浸透后贴敷于诱导注射点。封闭式包扎带包扎固定。(48±2)h后去除包扎带和滤纸片。观察半个月。半个月的观察发现：除阳性对照组外，其余各组均未产生刺激反应。遂在局部诱导斑贴前

6、(24+2)h即第39天用100g/L十二烷基硫酸钠石蜡液预处理未产生刺激反应的豚鼠，按摩导入局部皮肤，使产生轻度的刺激反应。3.3激发阶段第39天，动物的单侧腹部用剪刀和电动剃刀剃刮毛发4cm×6cm范围。第40天，用表l选定的激发阶段的浓度，浸透滤纸片，贴敷于每只豚鼠的单侧腹部。封闭式包扎带包扎固定。(24+2)h后去除包扎带和滤纸片。3.4动物观察去敷贴后24、48、72h观察试验组和对照组动物激发部位的皮肤情况。按如下评分标准评价红斑和水肿反应程度：无红斑：0分；极轻微红斑：1分；红斑清晰：2分；中度

7、红斑：3分；重度红斑至轻微焦痂形成：4分。无水肿：0分；极轻微水肿：1分；水肿清晰：2分；中度水肿：3分；重度水肿：4分。四实验结果见表2表各2组皮肤致敏率和皮肤反应计分组别诱导浓度激发时间观察时间红斑反应强度水肿反应强度致敏率（%）01230123阳性对照24h48h72h材料浸提液24h48h72h生理盐水24h48h72h